免疫グロブリンクラススイッチ誘導シグナル伝達系におけるKuの役割に関する研究

Ku在免疫球蛋白类开关诱导信号转导系统中的作用研究

• 批准号: 12051215
• 负责人: 森尾 友宏
• 金额: $ 1.92万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12051215/
• 关键词: Ku70; 80; DNA-PK; IL-4; CD40; CD23; translocation

#1 IL-4/CD40刺激後にKuが核内に移行する機構の解析今回の検討からKu70/80のチロシン残基がリン酸化されることが判明した。細胞質と核で比較すると、Kuのチロシンリン酸化の程度は細胞質内の方がより強いらしい。チロシンリン酸化が核内移行に関係しているかを検討するため、まずチロシンリン酸化部位の同定を試みている。Ku70,Ku80をCNBrで切断後、抗リン酸化チロシンブロットを行ったところ、Ku70,Ku80共1フラグメントのみがチロシンリン酸化バンドとして認められている。現在、他の消化酵素を用いTOF-MSにてリン酸化部位を同定中である。#2 KuのCD23遺伝子発現調節機構の解析KuはCD23のエンハンサー領域に結合する。IL-4R/CD40の共刺激によって核内に誘導されたKuによるCD23の発現調節を検討するため、CD23のプロモーター領域とCD23のエンハンサー領域を組み入れたルシフェラーゼベクターをB細胞株に遺伝子導入し、レポーター遺伝子アッセイを行った。細胞株やプロモーターの構成によって、IL-4R/CD40刺激後にエンハンサー活性が増強する場合と減弱する場合がありさらに詳しく解析している。#3 B細胞分化段階におけるKuの局在成熟B細胞ではKuの大半は細胞質内に局在する。ProBII,PreBII,成熟B細胞においてのKuの局在を細胞株を用いて検討したところ、細胞質内Ku/核内Ku発現量比はProB>PreB>matureBの順であった。#4 CD40と会合するKu70/80の部位、Kuと会合する分子の解析Ku70/80のいずれがCD40と会合するのかを明らかにし、結合部位を同定するため、Ku70を7〜8つの部分に分けてGSTとの融合タンパクを作成した。Kuと会合する分子に関しては複数のホモログを用意して、会合に必須のモチーフを検討している。

# 1 after IL-4/CD40 stimulation, the migration mechanism in the Ku nucleus was analyzed. This time, we detected the presence of amino acid residues in Ku70/80 cells. The nuclei of the cells are stronger than those of the cells, the degree of acidification, the degree of acidification, the degree of acidification and the degree of acidification. The acidizing site is the same as that of the acidified site. After the Ku70,Ku80 CNBr was cut off, anti-acidizing and anti-acidizing drugs were used to treat the mice. The total amount of Ku70,Ku80 was 1: 1. There was no significant difference between the two groups. Now, other digestive enzymes are used in the same way as the acidified site with TOF-MS enzyme. # 2 the Ku CD23 sub-organization parses the Ku CD23 information system in combination with the field of communication. The IL-4R/CD40 costimulatory signal in the nucleus has been detected in the Ku cell line and the cell line in the cell line. The CD23 has been detected in the nucleus, and the CD23 has been detected in the field. After IL-4R/CD40 stimulation, the activity of the cell line was increased, and the activity of the cell line was analyzed after stimulation. # 3 the differentiation segment of B cell is localized in most of the mature B cells, such as Ku, Ku. ProBII,PreBII, the amount of Ku in the Ku/ nucleus of the mature B cell line was compared with that of the ProB>PreB>matureB cell line in the cell line. # 4 CD40 rendezvous, Ku rendezvous, molecular analysis, Ku70/80 rendezvous, CD40 rendezvous, homographies, Ku70, 7, 8, parts, GST, fusion, fusion. Ku rendezvous is necessary for molecular rendezvous and reunion.

项目成果

Nagasawa M,Imai M,Imai K,Itoh S,Kajiwara M,Morio T,and Nonoyama S.: "In vitro class switch of B cells after cord blood stem cell transplantation in severe combined immune deficient (SCID) patient"American Journal of Hematology. 65. 176-179 (2000)

Nagasawa M、Imai M、Imai K、Itoh S、Kajiwara M、Morio T 和 Nonoyama S.：“严重联合免疫缺陷 (SCID) 患者脐带血干细胞移植后 B 细胞的体外类别转换”美国杂志

Kumaki S,Ishii N,Ohashi Y, et al. (28名、8番目): "Characterization of the γc chain among 27 unrelated Japanese patients with X-linked severe combined immunodeficiency (X-SCID)"Human Genetics. 107. 406-408 (2000)

Kumaki S、Ishii N、Ohashi Y 等人（28 人，第 8 名）：“27 名不相关的日本 X 连锁严重联合免疫缺陷 (X-SCID) 患者的 γc 链特征”人类遗传学 107。 408（2000）