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神経細胞の形態変化を捉える発現スクリーニングによる回路形成に働く拡散性分子の探索

通过捕获神经细胞形态变化的表达筛选，寻找在回路形成中发挥作用的可扩散分子

基本信息

批准号：
12053272
负责人：
玉田篤史
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Okazaki National Research Institutes
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究ではニューロンの形態変化を指標とした機能アッセイ系を用いた遺伝子発現スクリーニング法により、回路形成・成熟過程で働く拡散性分子を系統的に探索することを目的としている。アッセイ系の概略は、ライブラリーからのcDNAを導入した株細胞の凝集塊を作り、それと単離したニューロンを混ぜて、拡散性分子の濃度勾配を再現できるコラーゲンゲル内に包埋して共培養し、ニューロンの形態変化(特に突起伸長の方向性)を検出するものである。本研究では、まず、既知分子のcDNAを用いて、リポフェクション法の最適条件、分割するプールの数等を決める予備実験を行った。拡散性反発分子slit2,semaphorin3F cDNA導入細胞塊と視床上部、海馬、嗅球から単離した細胞との共培養で、組織片だけでなく単離細胞でも実際に形態変化が検出可能であることを確認した。さらに゜、実際のスクリーニングでは100個以上の異なるcDNAを混ぜてアッセイに用いることになるため、1/100のcDNA量でも形態変化を検出できることが必要とされる。その点について、導入するcDNA量を1/100にして同様のアッセイを行い、微量のcDNA量でも形態変化が検出出来ることを確認した。これらの予備実験の結果を踏まえて、ラット胎児脳組織よりcDNAライブラリーを作成し、このライブラリーを上記のアッセイ系を用いてスクリーニングする作業を開始し、現在拡散性分子の探索を進行中である。

The purpose of this study is to explore the development of molecular systems in order to achieve the goal of developing a mature molecular system through the formation of a mature molecular system. This is an overview of the system, in which the cells are agglutinated, the cells are agglutinated, the cells are mixed, and the molecules are dispersed. The results show that the cells are embedded in the cDNA, the cells are condensed, the cells are agglutinated, the cells are mixed, and the molecules are linked to each other. The purpose of this study is to determine the number of known molecules, such as the number of data, the number of known molecules, and so on. Slit2,semaphorin3F cDNA molecules are introduced into the upper part of the cell, puffer, olfactory bulb, cell culture, tissue culture, cell morphology and identification. The amount of cDNAs of more than one hundred cDNA mixtures, one hundred cDNAs and one hundred pounds of cDNAs are used to generate the necessary information for each customer. Click here, enter the cDNA measurement 1px100, and check out the trace amount of cDNA, the amount of cDNA, and the amount of cDNA. The results show that the cDNA system has been completed, and that the health care system has begun to operate and is now in the process of exploring dispersed molecules.