权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

仮想ヒトゲノム二次元電気泳動法による疾患関連遺伝子の解明

利用虚拟人类基因组二维电泳阐明疾病相关基因

基本信息

批准号：
12204097
负责人：
上田政和
金额：
--
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204097/
关键词：
RLGS 大腸菌仮想ヒトゲノム二次元電気泳動法疾患遺伝子 DNA

项目摘要

ヒトゲノム2次元電気泳動法により各種癌細胞に特異的なDNA構造や遺伝子構造を解明するには従来法では多くの時間と費用と労力を必要とした.そこで,ヒトゲノムプロジェクトの成果を踏まえて仮想ゲノム2次元電気泳動法を開発し簡便にDNA変化を同定することを目指して,既に全塩基配列が決定されている大腸菌ゲノムを利用してこの様なアプローチが可能かどうかを証明した.「方法」既に全塩基配列が決定されている大腸菌よりDNAを抽出し,制限酵素により断片化したのち断端部をラジオアイソトープでラベルし第1次元目の電気泳動を行い,さらに第2番目の制限酵素を作用させ第2次元目の電気泳動を施行した.それぞれのスポットについて塩基配列を決定するためにはスポットを切り出しベクターに組み入れ大腸菌にてDNAを増幅して全塩基配列を決定した.仮想ゲノム2次元電気泳動法は,分子量Mの対数と相対移動度mとの関係が線形関係(M)=a-bMにあることからコンピューターを用いて計算し,プロフィールを得た.上記仮想および実体2次元電気泳動のプロフィール比較し同一スポットと考えられる3スポットについてその塩基配列を検討した.制限酵素の組合せは2種類について仮想および実体2次元電気泳動法を施行し比較検討した.「結果」仮想ゲノム2次元電気泳動法にても実体2次元電気泳動法とほぼ同様のプロフィールが得られた.しかも,制限酵素の組合せを変化させるとゲノム2次元電気泳動プロフィールは全く異なっていたが,特定の制限酵素組合せにより得られた仮想および実体ゲノム2次元電気泳動プロフィールは一致していた.仮想および実体ゲノム2次元電気泳動プロフィールで同一と考えられたスポット3個について塩基配列を決定し比較したところ3個とも100%と一致した.「結語」仮想ゲノム2次元電気泳動法は新しい疾患関連遺伝子を同定するのに有用な方法である可能性が示された.

The two-dimensional electrokinetic method is necessary to understand the specific DNA structure and gene structure of various cancer cells. The results of this study indicate that the development of a two-dimensional electrokinetic method for DNA transformation is simple and easy, and that the use of a full-length DNA sequence for the determination of E. coli is possible. "Methods" include determining the sequence of DNA in E. coli, restriction enzyme, fragmentation, termination, and electromigration in the 1st dimension, and restriction enzyme in the 2nd dimension. The DNA sequence of E. coli was determined by DNA sequencing. The linear relationship between the molecular weight M and the relative mobility m is (M)=a-bM. In this paper, we compare the two dimensional electrokinetic parameters of the same sample with the three dimensional electrokinetic parameters of the same sample. The combination of restriction enzymes is compared between two kinds of enzyme and two-dimensional electrokinetic method. The results show that the two-dimensional electrokinetic method and the two-dimensional electrokinetic method are the same. The combination of restriction enzymes should be changed to 2-D electrophoresis. The combination of restriction enzymes should be changed to 2-D electrophoresis. The two dimensional electrophoresis patterns are the same as each other, and the three patterns are the same as each other. "Conclusion": The possibility of using two-dimensional electrokinetic method to identify new disease-related genes is demonstrated.