腎癌の特異的腫瘍マーカーの開発およびその遺伝子治療の基礎的研究

肾癌特异性肿瘤标志物开发及基因治疗基础研究

• 批准号: 12217063
• 负责人: 林 辰弥
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Mie University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12217063/
• 关键词: 腎癌; プロテインCインヒビター; プラスミノゲンアクチベーター; 転写調節領域; Sp1結合部位; AP2結合部位

近年、我国においても腎癌の発生率は増加の-途にあり、その発生機序の解明、検査診断法および治療法の開発は重要かつ緊急な社会的要請課題である。腎癌の発生機序については未だ不明な点が多く、腎癌の腫瘍マーカーさらにはその治療法に関しても未だ確立されていない。我々は、最近、腎癌患者の摘出癌部では非癌部に比較してプロテインCインヒビター(PCI)の発現が著しく低下していることを見い出した。PCIは、肝臓や腎臓で産生される血漿セリンプロテアーゼインヒビター(セルピン)の一つで、癌の浸潤・転移に密接に関与するウロキナーゼ型プラスミノゲンアクチベーター(uPA)を阻害することが知られている。このような背景の基、本年度は、腎癌におけるPCI発現低下機序の解明のために、腎近位尿細管上皮細胞におけるPCIの転写調節領域に関して検討を行うと共に、癌の浸潤におけるPCIの役割に関しても検討を行った。まずはじめに、腎臓における主要な産生細胞である腎近位尿細管上皮細胞におけるPCIの転写調節領域をルシフェラーゼをレポーター遺伝子として解析した結果、そのプロモーター領域としてはSp1結合部位が、エンハンサー領域としてはAP2結合部位が重要であることが明らかになった。次に、腎臓癌細胞の浸潤・転移におけるPCIの影響について、マトリゲルを用いたin vitro癌細胞浸潤モデルを用いて検討を行った。その結果、PCIは株化腎癌細胞であるCaki-1細胞のマトリゲルへの浸潤能を低下させることが明らかになった。次に、PCIを強制発現させたCaki-1細胞を作製し、その浸潤能の変化を同様に検討したところ、PCIcDNAを含まない発現ベクターを挿入して作製したPCI非発現Caki-1細胞(Caki-Mock細胞)に比較してPCIcDNAを含む発現ベクターを挿入して作製したPCI強制発現Caki-1細胞(Caki-PCI細胞)の浸潤能は著しく低下することが明らかになった。また、Caki-PCI細胞の培養上清中のuPA-PCI複合体は、Caki-Mock細胞のそれに比較して著しく増加していることが明らかになった。

In recent years, our country に お い て も kidney の 発 は raised birth rate plus の - way に あ り, そ の 発 vitality sequence の uttered, 検 check diagnostics お よ び therapy の open 発 は important か つ emergency な society to please subject で あ る. Kidney の 発 vitality sequence に つ い て は not unknown だ な point が く, kidney の swollen sores マ ー カ ー さ ら に は そ の therapy に masato し て も not だ さ れ て い な い. I 々 は, recently, the department of kidney の picked out patients with cancer で は non cancer department に compare し て プ ロ テ イ ン C イ ン ヒ ビ タ ー (PCI) の 発 が now the し く low し て い る こ と を see い out し た. A routine PCI は, liver perforatien や kidney で produce さ れ る plasma セ リ ン プ ロ テ ア ー ゼ イ ン ヒ ビ タ ー (セ ル ピ ン) の a つ で, の infiltrating planning move に contact に masato and す る ウ ロ キ ナ ー ゼ type プ ラ ス ミ ノ ゲ ン ア ク チ ベ ー タ ー (uPA) を resistance against す る こ と が know ら れ て い る. こ の よ う な background の base, this year's は, kidney に お け る PCI 発 now low machine sequence の interpret の た め に, renal proximal tubule epithelial cells in urine に お け る PCI の planning, regulating field に masato し て 検 line for を う と に, の infiltrating に お け る PCI の service cut に masato し て も 検 line for を っ た. ま ず は じ め に is crucial, kidney に お け る main な cells で あ る renal proximal tubule epithelial cells in urine に お け る PCI の planning, regulating field を ル シ フ ェ ラ ー ゼ を レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 と し て parsing し た results, そ の プ ロ モ ー タ ー field と し て は Sp1 binding site が, エ ン ハ ン サ ー field と し て は AP2 important で が combining parts Youdaoplaceholder0 ある とが Ming ら になった になった. Crucial time に, kidney cancer の infiltrating planning moving に お け る PCI の influence に つ い て, マ ト リ ゲ ル を with い た in vitro cells infiltrating モ デ ル を with い て 検 line for を っ た. そ の results, PCI は strains of kidney cancer cells で あ る Caki - 1 cell の マ ト リ ゲ ル へ の low infiltration can を さ せ る こ と が Ming ら か に な っ た. に, PCI を forced 発 now さ せ た Caki - 1 cell を し, そ の can infiltrate の variations change を with others に beg し 検 た と こ ろ, PCIcDNA を containing ま な い 発 now ベ ク タ ー を scions into し て cropping し た PCI 発 Caki now - 1 cell (Caki - Mock cell) に compare し て PCIcDNA を containing む 発 now ベ ク タ ー を scions into し て cropping し た PCI forced 発 Caki now - 1 cell (Caki - PCI cells) の infiltration can は し く low す る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, の Caki - PCI cell culture supernatant of の uPA PCI complex は, Caki Mock cell の そ れ に compare し て the し く raised plus し て い る こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

Watanabe,R., et al.: "Plasma levels of activated protein C-protein C inhibitor complex in patients with hypercoagulable states."Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Watanabe,R., et al.：“高凝状态患者中活化蛋白 C-蛋白 C 抑制剂复合物的血浆水平。”Am.J.Hematol.. 65. 35-40 (2000)

Ido,M., et al.: "Identification of a novel 33-kDa Ser/Thr kinase that phosphorylated the cytoplasmic tail of protease-activated receptor 1 (thrombin receptor) in human platelets."Thromb.Haemost.. 83. 617-621 (2000)

Ido,M., 等人：“鉴定一种新型 33-kDa Ser/Thr 激酶，该激酶磷酸化人血小板中蛋白酶激活受体 1（凝血酶受体）的胞质尾部。”Thromb.Haemost.. 83. 617-

Shimizu,S., et al.: "Thrombin stimulates the expression of PDGF in lung epithelial cells."Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)

Shimizu,S., et al.：“凝血酶刺激肺上皮细胞中 PDGF 的表达。”Am.J.Physiol.Lung Cell.Mol.Physiol.. 279. 503-510 (2000)

Suzuki,K.and Hayashi,T.: "Cis-elements required for expression of human protein C inhibitor (PCI) gene in HepG2 cells and its androgen-dependent expression in rat reproductive organs."Sem.Thromb.Haemost.. 26. 75-83 (2000)

Suzuki,K. 和 Hayashi,T.：“HepG2 细胞中人蛋白 C 抑制剂 (PCI) 基因表达及其在大鼠生殖器官中雄激素依赖性表达所需的顺式元件。”Sem.Thromb.Haemost.. 26。

Yuasa, H., et al.: "Bovine protein C inhibitor has a unique reactive site and can transiently inhibit plasmin"Thromb. Haemost. 83. 262-267 (2000)

Yuasa, H.等人：“牛蛋白C抑制剂具有独特的反应位点，可以暂时抑制纤溶酶”血栓。