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レトロトランスポゾンMAGGYのアクチベーションタギングへの利用

使用逆转录转座子 MAGGY 进行激活标记

基本信息

批准号：
12876011
负责人：
土佐幸雄
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度の結果より、MAGGYをPyricularia属菌ゲノムに導入して42C、2時間の熱処理をすると、効率よくそのプロモーターを活性化できることが明らかとなった。そこで、MAGGY全長を含むプラスミドpMGY70をハイグロマイシン耐性遺伝子を持つプラスミドpSH75とともにコムギいもち病菌Br48にco-transformationし、約100個の形質転換体を得た。これらと母菌Br48を熱処理し、生育、胞子の形態などを比較検討した。ある形質転換体は、母菌より強い熱耐性有するように思われたが、その差は小さく遺伝子単離実験に進むには不十分であった。つぎに、これらを熱処理後エンバク、コムギに接種し、接種後20Cおよび26Cで培養して病徴を比較検討した。母菌との差が見られるもの、すなわち母菌よりコムギに対する病原性が低下したものおよび母菌よりエンバクに対する病原性が増高したものがいくつか認められたが、繰り返し実験の結果、遺伝子単離に進めるほどの有意差は認められなかった。いくつかの形質転換体についてMAGGY挿入部位の塩基配列を検討したところ、いずれもAT richなnon-coding領域であった。以上のことから、MAGGYはタギングツールとして開発するには、(i)ゲノムにランダムに挿入する(ii)大量の形質転換体から望むものをスクリーニングするためにさらなる工夫が必要であると考えられた。

The results of the previous year, MAGGY, Pyricularia genus bacteria, imported into 42C, 2 Time of heat treatment, efficiency of heat treatment, activation of heat treatment, efficiency of heat treatment and activation of heat treatment.そこで, MAGGY full length を containing むプラスミドpMGY70 をハイグロマイシンresistant 伝子をhold つプラスミドpSH7 5とともにコムギいもちBacteria Br48 co-transformationし, about 100 transformation bodies were obtained. The mother strain Br48 is heat-treated, the fertility and spore morphology are compared. It's a shape-shifting body, and the mother fungus is strong and heat-tolerant.が、その Poor は小さく伝子単里実験に入むにはNot very であった.つぎに、これらをAfter heat treatment エンバク、コムギに inoculation し、After inoculation 20C および26C でcultivation して Disease 徴をComparison 検 Discussion した. The mother bacterium is the same as the mother bacterium.るPathogenicity of low pathogenicity The sex is getting higher As a result, the remaining child is separated from the child and is deliberately different.いくつかのmorphological change body についてMAGGY insertion site の塩base arrangement を検question したところ, いずれもAT richなnon-coding field であった. Above のことから、MAGGYはタギングツールとして开発するには、(i)ゲノムにランダムにINSERT する( ii) A large number of physical changes are necessary to change the body.