幼若ホルモン受容体の探索

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昨年度に続き、膜結合型幼若ホルモン受容体を検索するための発現クローニング法の確立を進めた。その結果、G-タンパク質共役型受容体についてはG-タンパク質やcAMP依存的Cl-チャンネルであるCFTRを共発現させたアフリカツメガエル卵母細胞を用いた電気生理学的手法でのクローニング系の確立に成功した。現在、様々な組織から調整したcDNAライブラリーについて、この発現系を用いて目的クローンの単離を目指しているが、これまでにポジティブなプールを見出すことはできていない。一方、クローニングのためのmRNAの材料、さらに細胞内情報伝達系など生化学的解析のためにJH受容体が確実に発現している細胞を見出すために昆虫培養細胞の検索を行った。昆虫細胞のいくつかは脱皮ホルモンであるエクジソンに反応して形態変化を起こすことが知られているが、これらの細胞に同時にJHを加えることでエクジソン単独では見られない変化が観察されるかどうかを検討した。現在までにJH添加の有無によって形態が変化する培養細胞は見出されていないが、これらの細胞についてもエクジソンカスケード系遺伝子の発現量の変化など形態以外の遺伝子発現量の変化について検討を行っている。