家族性乳癌原因遺伝子Brca2の欠損細胞株作成によるBrca2の機能解析-乳癌由来変異Brca2分子の機能評価システムの構築-

通过创建家族性乳腺癌致病基因 Brca2 缺陷细胞系来进行 Brca2 功能分析 - 构建乳腺癌衍生突变 Brca2 分子的功能评估系统 -

• 批准号: 12877026
• 负责人: 高田 穣
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kawasaki Medical School
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877026/
• 关键词: BRCA2; 相同DNA組み換え; 家族性乳ガン

様々な状況証拠から、BRCA2の変異によってHRの異常が起こっていることが推定されている。本研究ではまず、ニワトリBRCA2の全長cDNAのクローニングを行った。ヒトBRCA2の部分配列をプローブとしてストリンジェンシーを下げたハイブリでニワトリライブラリーをスクリーニングし、N末、C末のcDNAクローンを得た。さらにその中間に6kb程度の不明部分があったので、そこはN末、C末の既知配列からプライマーをデザインしてPCRし、ニワトリcDNAの中間部分を得た。現在ドラフトシーケンスは終了し、さらに確認のシーケンスを行っている。ヒトのBRCA2とはかなりダイバージした部分、良く保存された部分も見られ、機能上重要な部分が浮かび上がってきそうである。さらに、ゲノムクローンを分離し、ターゲティングベクターを作成し、DT40にトランスフエクトしてクロンをサザンで選別し、ヘテロのクローンを得た。このヘテロヒトBRCA2を発現させてウェスタンを行って確認しようとしている。BRCA2が巨大なタンパクであるためか、ウェスタンブロットがなかなか成功しない。現在Inducible Cre recombinaseの使用も検討中である。

様々な Status Certificate拠から、BRCA2の変differentによってHRのAbnormalがriseこっていることが presumedされている. In this study, the full-length cDNA of BRCA2 was analyzed.ヒトBRCA2's partial allocation sequenceニワトリライブラリーをスクリーニングし, N-terminal, C-terminal cDNA クローンを得た. The unknown part of さらにその中に6kb, known parts of があったので, そこはN end, and C end List of からプライマーをデザインしてPCRし, and the middle part of ニワトリcDNAのを得た. Now the ドラフトシーケンスは is over, and the さらにconfirmation is のシーケンスを行っている.ヒトのBRCA2とはかなりダイバージしたpart, good and good preservationされたPart of it is clear, and the functionally important part is floating.さらに、ゲノムクローンをSeparationし、ターゲティングベクターを成し、DT4 0にトランスフエクトしてクロンをサザンで选选し、ヘテロのクローンを gotた.このヘロヒトBRCA2を発appearsさせてウェスタンを行ってconfirmationしようとしている. BRCA2 is a huge success. Now Inducible Cre recombinase uses も検中である.

项目成果

Motoda K: "SHP-1/ITIM-independent inhibitory signaling through murine NK cell receptor Ly-49A in a transfected B cell line."Immunology. 100. 370-377 (2000)

Motoda K：“在转染的 B 细胞系中，通过小鼠 NK 细胞受体 Ly-49A 产生不依赖于 SHP-1/ITIM 的抑制信号传导。”免疫学。

Kurosaki T: "B cell-receptors. In Encyclopedia of Life Sciences."Macmillan Reference Limited, Hampshire, England. (in press).

Kurosaki T：“B 细胞受体。生命科学百科全书。”Macmillan Reference Limited，汉普郡，英国。

Kurosaki T: "Regulation of phosholipase C-γ2 pathway in B cells."Immunol Rev. 176. 19-29 (2000)

Kurosaki T：“B 细胞中磷脂酶 C-γ2 途径的调节”。Immunol Rev. 176. 19-29 (2000)

Sonoda E: "Reverse genetic studies of homologous DNA recombination using the chicken B-lymphocyte line, DT40."Phil Trans R Soc Lond B. 356. 111-117 (2001)

Sonoda E：“使用鸡 B 淋巴细胞系 DT40 进行同源 DNA 重组的反向遗传学研究。”Phil Trans R Soc Lond B. 356. 111-117 (2001)

Tokata M: "The Rad51 Paralog Rad 51B Promotes Homologous Recombinational Repair."Mol Cell Biol. 20. 6476-6482 (2000)

Tokata M：“Rad51 旁系同源物 Rad 51B 促进同源重组修复。”Mol Cell Biol。