ファンコニ貧血遺伝子FANCIによるDNAクロスリンク修復制御機構

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新規に同定されたファンコニ貧血原因遺伝子FANCIは、キーファクターであるFANCD2と会合し、I-D2複合体として存在している。DNA障害後、FANCD2、FANCIともにコア複合体によってモノユビキチン化され、核内にてフォーカスを形成し、DNA修復に機能する。FANCIとFANCD2はお互いのモノユビキチン化に必須であるが、その詳細な分子機構は明らかではない。FANCIはATRによりリン酸化される候補サイトを少なくとも10程度持っている。我々は、FANCIのノックアウトDT40細胞株を作製してFANCIの発現系を構築し、リン酸化候補部位変異体を発現させ、その機能解析を行った。(1)FANCIのモノユビキチン化サイト近傍の6カ所のSQモチーフをすべてAQに置換したところ、その発現細胞はシスプラチンに高感受性であり、FANCD2とFANCI自体モノユビキチン化されなかった。(2)同じく6カ所のSQサイトをDQに置換したところ、FANCD2とFANCIは構成的にモノユビキチン化され、FANCIは核内でDNAダメージをしなくてもフォーカスを形成し、しかもクロマチン分画に検出された。(3)フォスタグを使用したウェスタンにより、これらの候補部位が実際にリン酸化されることがわかった。以上の結果より、FANCIのリン酸化がDNA障害後のファンコニ経路の活性化スイッチであると考えられる。