低分子量GTP結合蛋白Rhoファミリーによる膵癌細胞のMMP-1発現調節機構

低分子量 GTP 结合蛋白 Rho 家族对胰腺癌细胞中 MMP-1 表达的调节

• 批准号: 12877088
• 负责人: 朴沢 重成
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877088/
• 关键词: 膵癌細胞; MMP-1; 遺伝子転写; 低分子量GTP結合蛋白; Rac1; AP-1; 膵癌; マトリックス・メタロプロテァーゼー1; 低分子量G蛋白; 遺伝子転写調節; TNF-alpha; cell motility

平成13年度の研究目的は、膵癌細胞においてRac1蛋白によるMMP-1遺伝子転写調節に関わる転写因子を同定することであった。1.Rac1蛋白によって調節されるMMP-1遺伝子プロモーターのcis領域の同定持続活性型Rac1V12プラズミドと、プロモーター領域の5'側より削るdeletion constructをヒト膵癌細胞にco-transfectionし、ルシフェラーゼアッセイを行い比較検討した。その結果、-560bpと+76bpの間の遺伝子プロモーター領域に、Rac1蛋白によって調節されるcis領域が存在することが示唆された。同領域にはAP-1予想結合部位が数カ所存在する。MMP-1の基礎転写に必須とされかつ種々の刺激による転写に重要であると報告されている最近位のAP-1結合部位にPCR法によるsite-directed mutagenesisで変異を導入した。変異プロモーターと持続活性型Rac1V12プラズミドをco-transfectionし、ルシフェラーアッセイを行ったが完全に転写活性は失われなかった。したがってRac1によるMMP-1転写活性亢進に必要なcis領域は他の部位にも存在することが示唆された。2.ゲルシフト解析AP-1結合領域に相当するDNA配列を含む二本鎖oligo nucleotideをプローブとして標識し、Rac1V12プラズミドおよびempty vectorを遺伝子導入したヒト膵癌細胞から分離抽出した核蛋白をゲルシフト解析した。その結果AP-1のみでなく他の転写因子がRac1蛋白によるMMP-1遺伝子転写活性の亢進に関わっていることが示唆された。3.現在さらに詳細なプロモーター領域の検討を行っている。

の research purpose は, pp.47-53 13 Cui cancer に お い て Rac1 protein に よ る traces of MMP 1 伝 son planning write regulating に masato わ る planning write factor を with fixed す る こ と で あ っ た. 1. Rac1 protein に よ っ て adjust さ れ る traces of MMP 1 伝 son プ ロ モ ー タ ー の の cis field be hold 続 activity type Rac1V12 プ ラ ズ ミ ド と, プ ロ モ ー タ の ー field 5 'side よ り cut る deletion The construct を ヒ ト Cui cancer に co - transfection し, ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ を row い compare beg し 検 た. そ の results and bp と + 76-560 bp の の between heritage 伝 son プ ロ モ ー タ に ー field, Rac1 protein に よ っ て adjust さ れ が る cis field exist す る こ と が in stopping さ れ た. The number of が existing in カ of the intended binding site of AP-1 in the same field に する. MMP 1 の based planning must write に と さ れ か つ kind 々 の stimulus に よ る planning important に writing で あ る と report さ れ て い る combining site recently a の AP - 1 に PCR method に よ る site - directed mutagenesis で - different を import し た. - different プ ロ モ ー タ ー と hold 続 activity type Rac1V12 プ ラ ズ ミ ド を co - transfection し, ル シ フ ェ ラ ー ア ッ セ イ を line っ た が completely に planning write activity は lost わ れ な か っ た. し た が っ て Rac1 に よ る MMP 1 hyperthyroidism に necessary な cis planning write activity areas は he の parts に も exist す る こ と が in stopping さ れ た. 2. ゲ ル シ フ ト parsing AP - 1 field に fairly す る DNA match column を containing む 2 lock oligo nucleotide を プ ロ ー ブ と し て identification し, Rac1V12 プ ラ ズ ミ ド お よ び empty The vectorを seed 伝 is introduced into the <s:1> たヒト膵 cancer cell ら ら to isolate and extract the <s:1> た nucleoprotein をゲ シフト シフト シフト to analyze the た. そ の results AP - 1 の み で な く he の planning write factor が Rac1 protein に よ る traces of MMP 1 伝 son planning write activity の hyperthyroidism に masato わ っ て い る こ と が in stopping さ れ た. 3. Now さらに details なプロモ なプロモ タ タ タ field 検 検 discuss を trade って る る る.

项目成果

Okazaki I.: "Molecular mechanism of the reversibility of hepatic fibrosis"J. Gastroenterol Hepatol. 15 Supp1. D26-D32 (2000)

冈崎一.：“肝纤维化可逆性的分子机制”J.

朴沢 重成: "肝星細胞におけるマトリックスメタロプロテアーゼ-1 遺伝子発現"最新医学. 55(8). 58-62 (2000)

Shigenari Hokuzawa：“肝星状细胞中的基质金属蛋白酶-1 基因表达”现代医学 55(8) (2000)。

Watanabe T. et al: "Dynamic change of cells expressing MMP-2 mRNA and MT1-MMPmRNA in the recovery from liver fibrosis in the rat"J. Hepatology. 35. 465-473 (2001)

Watanabe T.等：“大鼠肝纤维化恢复过程中表达MMP-2 mRNA和MT1-MMP mRNA的细胞的动态变化”J。

Hozawa S: "Molecular mechanisms of MMP-1 gene expression in hepatic stellate cells."In Gastroenterology and Hepatology (Millennium 2000). (in press). (2001)

Hozawa S：“肝星状细胞中 MMP-1 基因表达的分子机制。”《胃肠病学和肝病学》（Millennium 2000）。

岡崎勲: "肝線維化の分子生物学"肝臓. 44(11). 741-753 (2000)

Isao Okazaki：“肝纤维化的分子生物学”肝脏 44(11)。