膵癌の神経浸潤の分子機構に関する研究-共培養系を用いた実験モデルの確立と細胞外マトリックス分解酵素発現からみた分子機序の解明-

胰腺癌神经侵袭的分子机制研究 - 利用共培养系统建立实验模型并从细胞外基质降解酶的表达阐明分子机制 -

• 批准号: 11877095
• 负责人: 朴沢 重成
• 金额: --
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877095/
• 关键词: 膵癌; 神経浸潤; 実験モデル; 共培養; 細胞外マトリックス分解酵素

本研究の目的は、膵癌の神経浸潤のin vitro浸潤実験モデルを確立しその分子機序を解明することであった。1.膵癌の神経浸潤実験モデルのための、膵癌細胞と末梢神経細胞の共培養系の確立1)in vitro浸潤実験モデル(基底膜マトリックスゲルを介した共培養):無血清培養しておいたヒト膵癌細胞Paca-2と、あらかじめ神経分化誘導した神経細胞PC12を24時間共培養した。分化誘導神経細胞との共培養において、膵癌細胞のin vitro浸潤能は、単独培養、未分化神経細胞との共培養に比較して、有意差をもって亢進した。2)細胞増殖能の検定(神経細胞の調整培地を用いた共培養):未分化および分化誘導神経細胞の調整培地を無血清培地で希釈系列とし膵癌細胞に添加し、24時間後にMTTアッセイを行い膵癌細胞の増殖能を比較検討した。添加した分化誘導神経細胞の調整培地の用量依存症に、膵癌細胞の増殖能が亢進した。以上により、ヒト膵癌細胞Paca-2と神経分化誘導したPC12の共培養が、膵癌の神経浸潤のin vitro浸潤実験モデルとして有用であることが示唆された。2.共培養の際の膵癌細胞の細胞外マトリックス分解酵素MMPsの発現検討1で認められた実験モデルにおいて、膵癌細胞の細胞外マトリックス分解酵素MMP-9の発現の発現が抑制されることが、Zymographyで示唆された。これによって、神経由来の因子によって変化する膵癌細胞発現系の簡便な指標としてMMP-9の発現を用いることができることが示唆された。3.神経由来の膵癌細胞増殖(向神経)因子の同定TGFβ、EGF受容体、NGFに対する抗体を上記の1.あるいは2.の実験系に添加し比較検討したが、in vitro浸潤能亢進の抑制あるいはMMP-9の発現抑制の阻止を認めなかった。したがって、新規の神経由来の膵癌細胞増殖(向神経)因子の関与が示唆された。

The aim of this study was to elucidate the molecular mechanism of tumor invasion in vitro. 1. Establishment of a co-culture system of tumor cells and peripheral neurons 1)In vitro invasion: Serum-free culture of tumor cells Paca-2 and peripheral neurons PC12 for 24 hours In co-culture of differentiated neurons, cancer cells can be infiltrated in vitro, in isolation, and in co-culture of undifferentiated neurons. 2)Establishment of cell proliferation ability (co-culture in conditioned culture of neurons): Comparison of proliferation ability of undifferentiated and differentiation-induced neurons in conditioned culture of serum-free series and cancer cells after 24 hours of MTT assay. Addition of differentiation inducing cells regulates the dose-dependent growth of cancer cells. The above results show that the tumor cells Paca-2 and PC12 are co-cultured and the tumor cells are infiltrated in vitro. 2. Expression of extracellular matrix metalloproteinase MMPs in cancer cells during co-culture1. Inhibition of expression of extracellular matrix metalloproteinase MMP-9 in cancer cells. A simple indicator of MMP-9 expression in cancer cell development system 3. Antibodies against TGFβ, EGF receptor and NGF in neurogenic tumor cell proliferation (neurogenesis) factors are listed above. 1. In addition, in vitro invasion inhibition and inhibition of MMP-9 expression are also identified. The relationship between neurogenesis and tumor cell proliferation (neurogenesis) factors and the expression of neurogenesis.

项目成果

Hisamatu T et al: "Interferon-inducible gene family 1-8V expression in colitis-associated colon cancer and severely inflamed mucosa in ulcerative colitis"Cancer Reserch. 59. 5927-5931 (1999)

Hisamatu T 等人：“干扰素诱导基因家族 1-8V 在结肠炎相关结肠癌和溃疡性结肠炎中严重发炎的粘膜中的表达”癌症研究。

渡辺 哲 他: "遺伝子検査の健康管理への導入の可能性と限界"日本醫事新報. 3936号. 37-45 (1999)

Satoshi Watanabe 等人：“将基因检测引入健康管理的可能性和局限性”日本医学报第 3936. 37-45 (1999)。

朴沢 重成 他: "低分子量G蛋白Rhoファミリーは、ヒト膵癌培養細胞におけるMMP-1およびMMP-9の遺伝子転写を制御する"日本癌学会誌(第58回総会記事). 90. 35 (1999)

Shigenari Hokzawa 等：“低分子量 G 蛋白的 Rho 家族控制培养的人胰腺癌细胞中 MMP-1 和 MMP-9 的基因转录”日本癌症协会杂志（第 58 届大会文章）。 (1999)

Watanabe T et al: "Gene expression of interstitial collagenase in both progressive and recovery phase of rat liver fibrosis induced by carbon tetrachloride"Journal of Hepatology. (in press). (2000)

Watanabe T等人：“四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化进展期和恢复期间质胶原酶的基因表达”肝脏病学杂志。

Okazaki I et al: "Hepatic fibrosts and hepatic sinusoidal cells"Liver Diseases and Hepatic Sinusoidal cells. 242-251 (1999)

Okazaki I 等人：“肝纤维瘤和肝窦细胞”肝脏疾病和肝窦细胞。