うつ病患者におけるグルココルチコイドホルモン受容体異常の分子生物学的検討-視床下部-下垂体-副腎系機能異常との関連-

抑郁症患者糖皮质激素受体异常的分子生物学研究-与下丘脑-垂体-肾上腺系统功能障碍的关系-

• 批准号: 12877149
• 负责人: 橋本 学
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Yamaguchi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877149/
• 关键词: グルココルチコイド受容体; α、β isoform; うつ病; リンパ球; SSCP法; α,β isoform

本研究は、うつ病の原因遺伝子の候補として、HPA系で重要な役割を担うGC受容体遺伝子について検討するものである。人リンパ球を試料としてGC受容体遺伝子異常を検討する実験系を構築し、対照群と患者群のGC受容体遺伝子にどれほどの多系や変異が存在するかを検討した。まず、リンパ球を試料としてRT-PCR SSCP法を行った。対照群と患者群の血液を低浸透圧で溶血した後に遠心分離によりリンパ球を得た。リンパ球を蛋自変性剤中でホモジナイズしたライセートをRNA分離用スピンカラムで遠心分離し総RNAを得た。総RNAをPCRプライマーを用いて逆転写とPCR反応を1stepで行った。PCR用のプライマーは、既報のcoding regionを網羅し約400bpのPCR産物を作る様にデザインしたものを改め、coding regionに加えて、5'と3'のnon coding regionを網羅し、それぞれが約240bpのPCR産物を作る様にデザインした。このプライマーを用いて、1step RT-PCR法を行い、GC受容体のαとβのisoformに共通な領域のPCR産物10種と、αとβに特有な領域のPCR産物がそれぞれ11種と6種ずつ得られた。PCR産物にホルムアミドを加え加熱・急冷却することにより1本鎖化し、これを温度を15度に保ちSSCP用泳動装置でPAGEを行い、ゲルを銀染色することにより1本鎖化した2本のバンドを得た。対照群4人及ぴ患者群の4人のSSCPの結果では多系は確認されず、GC受容体遺伝子の多系の頻度は高くないと思われた。また、患者群のバンドを対照群と比較して移動度が変化した物はなく、患者遺伝子に変異は見つからなかった。今後も、今回構築した実験系を用いて、対照群と患者群の数を増やすことにより、うつ病患者のGC受容体遺伝子異常を検討していく予定である。

は, this study う つ disease cause of の survived 伝 の alternate と し て, HPA で cut を bear important な service う GC by let body heritage 伝 son に つ い て beg す 検 る も の で あ る. People リ ン パ ball を sample と し て GC by let body heritage 伝 child abnormal を beg す 検 る be 験 を build し, according to the group of seaborne と patients to let body heritage group の GC 伝 son に ど れ ほ ど の is more や variations exist different が す る か を beg し 検 た. Youdaoplaceholder0, リ リ パ パ ball を sample と て てRT-PCR SSCP method を った. Polices according to group と patients group の を low blood soaked 圧 で hemolysis し た に far heart after separation に よ り リ ン パ ball を た. リ ン パ ball を eggs from - sexual tonic で ホ モ ジ ナ イ ズ し た ラ イ セ ー ト を RNA separation with ス ピ ン カ ラ ム で telecentric separation し 総 RNA を た. を 総 RNA PCR プ ラ イ マ ー を with い て inverse planning write と PCR anti 応 を line 1 step で っ た. PCR with の プ ラ イ マ ー は, both reported の coding region about 400 bp を snare し を の PCR products for る others に デ ザ イ ン し た も の を め instead, coding region に plus え て, 5 'と 3 の non coding The regionを collects approximately 240bp of <s:1> PCR products を as る samples, にデザ た and <s:1> た た た た た た た た た た た た た た た た. こ の プ ラ イ マ ー を with い て line, 1 step rt-pcr method を い, GC, let body の alpha と beta の isoform に な common area 10 と の PCR products, alpha と beta に な special field が の PCR products そ れ ぞ れ 11 と six ず つ must ら れ た. PCR products に ホ ル ム ア ミ ド を plus え heating, sharp cooling す る こ と に よ り this lock し, こ れ を 15 degrees temperature を に bartender ち SSCP with swimming device で PAGE を い, ゲ ル を silver staining す る こ と に よ り this lock turn し た 2 this の バ ン ド を た. According to the group of four people and seaborne ぴ patients group of 4 の の SSCP の results で は mostly は confirm さ れ ず, GC, let body heritage 伝 son の is の more high frequency は く な い と think わ れ た. ま た, patient group の バ ン ド を according to group of seaborne と compare し て が mobile degrees - the し た content は な く, patients survived 伝 に - see different は つ か ら な か っ た. Future も, today back to construct し た be を 験 department with い て number, according to the group of patients with と seaborne groups の を rights や す こ と に よ り, う つ patients の GC by let body heritage 伝 child abnormal を beg し 検 て い く designated で あ る.