小児脳幹部神経膠腫の細胞周期解析-その増殖能と細胞周期関連遺伝子異常について-

小儿脑干胶质瘤的细胞周期分析-其增殖能力和细胞周期相关的遗传异常-

• 批准号: 12877208
• 负责人: 田中 隆一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877208/
• 关键词: 小児脳腫瘍; 脳幹部神経膠腫; がん抑制遺伝子; RB遺伝子; 遺伝子治療

当施設にてこれまでに樹立、継代され、すでにp53、p16、p21、PTEN遺伝子の変異が検索されてきた成人大脳半球の膠芽腫の培養細胞10株を用いてRB遺伝子(Retinoblastomaがん抑制遺伝子)の変異を検索した。変異の検索はDNA、mRNA蛋白のそれぞれについて検索した。その結果は次の通りであった。(1)DNAについては、その欠失について13番染色体長腕の13q14.2に存在するRB遺伝子座のイントロン20内に存在するmicrosatellite marker Rb1.20を用いて検索し、10株中7株に一方の遺伝子の欠失(LOH: loss of heterozygousity)の可能性が示唆され、RB mRNAの変異部位に対応する部分のDNAのシークエンスで遺伝子欠失・変異を認めた。(2)mRNAについてはノーザンブロット法にてその発現を検索し、10株中1株(LOH陽性例)で発現の消失が認められた。またRT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)法による発現の検索では発現消失例はなく、全例にmRNAが認められた。次に、RB mRNAの変異の検察については、RB mRNAの全長の83%に対してRNA-SSCP法およびシークエンスを行い10株中2株においてRb mRNAの部分的欠損が認められた(いずれもLOH陽性例)。(3)蛋白についてはウエスタンブロット法によるRB蛋白の発現の解析、およびゲルシフト法によるRB蛋白の機能(E2Fへの結合)の解析を行ったが、正常RB蛋白との有意な差は得られなかった。

When the experiment was conducted, the p53, p16, p21 and PTEN genes were detected in 10 strains of cultured cells from adult human glioma. Different types of DNA, mRNA and protein can be detected. The result is that it is not easy to get rid of it. (1) The possibility of loss of heterozygosity (LOH) in 7 out of 10 strains was detected, and some of the DNA fragments were missing and identified in the variant sites of RB mRNA. (2)mRNA expression was detected in 1 out of 10 strains (LOH positive). The reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) method was used to detect and detect the presence and absence of mRNA. In addition, 83% of RB mRNA length was detected by RNA-SSCP method, and 2 out of 10 RB mRNA strains were detected by LOH-positive method. (3)Analysis of RB protein development, analysis of RB protein function (E2F binding), analysis of normal RB protein and intentional difference between RB protein and RB protein.