小児脳幹部神経膠腫の細胞周期解析-その増殖能と細胞周期関連遺伝子異常について-

小儿脑干胶质瘤的细胞周期分析-其增殖能力和细胞周期相关的遗传异常-

• 批准号: 12877208
• 负责人: 田中 隆一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12877208/
• 关键词: 小児脳腫瘍; 脳幹部神経膠腫; がん抑制遺伝子; RB遺伝子; 遺伝子治療

当施設にてこれまでに樹立、継代され、すでにp53、p16、p21、PTEN遺伝子の変異が検索されてきた成人大脳半球の膠芽腫の培養細胞10株を用いてRB遺伝子(Retinoblastomaがん抑制遺伝子)の変異を検索した。変異の検索はDNA、mRNA蛋白のそれぞれについて検索した。その結果は次の通りであった。(1)DNAについては、その欠失について13番染色体長腕の13q14.2に存在するRB遺伝子座のイントロン20内に存在するmicrosatellite marker Rb1.20を用いて検索し、10株中7株に一方の遺伝子の欠失(LOH: loss of heterozygousity)の可能性が示唆され、RB mRNAの変異部位に対応する部分のDNAのシークエンスで遺伝子欠失・変異を認めた。(2)mRNAについてはノーザンブロット法にてその発現を検索し、10株中1株(LOH陽性例)で発現の消失が認められた。またRT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction)法による発現の検索では発現消失例はなく、全例にmRNAが認められた。次に、RB mRNAの変異の検察については、RB mRNAの全長の83%に対してRNA-SSCP法およびシークエンスを行い10株中2株においてRb mRNAの部分的欠損が認められた(いずれもLOH陽性例)。(3)蛋白についてはウエスタンブロット法によるRB蛋白の発現の解析、およびゲルシフト法によるRB蛋白の機能(E2Fへの結合)の解析を行ったが、正常RB蛋白との有意な差は得られなかった。

When facilities に て こ れ ま で に set, 継 さ れ, す で に p53, p16, p21, traces of PTEN 伝 son の - different が 検 cable さ れ て き た into NPC 脳 hemisphere の rubber buds swell の 10 strains cultured cells を with い て RB heritage 伝 child (Retinoblastoma が ん inhibit heritage 伝) の - different を 検 cable し た. Mutant 検 cable 検 DNA, mRNA protein それぞれに それぞれに て検 て検 cable た. The そ そ result そ times そ passes through そ であった. (1) DNA に つ い て は, そ の owe lost に つ い て 13 times long chromosome 13 q14 during April 12-15 wrist の. 2 に exist す る RB heritage 伝 stroma の イ ン ト ロ ン に exist within 20 す る microsatellite marker Rb1.20 を with い て 検 cable し, 10 strains of 7 strains に side の heritage 伝 の owe son lost (LOH: Loss of possibility heterozygousity) の が in stopping さ れ, RB mRNA の - different parts に 応 seaborne す る part の DNA の シ ー ク エ ン ス で heritage 伝 lost son owe · - different を recognize め た. (2) mRNA に つ い て は ノ ー ザ ン ブ ロ ッ ト method に て そ の 発 now を 検 cable し, 1 strain of 10 strains (LOH positive) で 発 の disappear が now recognize め ら れ た. Youdaoplaceholder0 RT-PCR(reverse transcription polymerase chain reaction) method による occurrence of <s:1> 検 cable で <s:1> occurrence of disappearance cases <s:1> なく and full cases にmRNAが identification められた. に, RB mRNA の - different の 検 examine に つ い て は, RB mRNA の 83% span の に し seaborne て RNA - SSCP method お よ び シ ー ク エ ン ス を い 10 strains of the two strains に お い て RB mRNA の part of owe loss が recognize め ら れ た (い ず れ も LOH positive cases). (3) protein に つ い て は ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト method に よ る RB protein の 発 is の parsing, お よ び ゲ ル シ フ ト method に よ る RB protein の function (E2F へ の) line analytical を の っ た が, normal RB protein と の intentionally な poor は must ら れ な か っ た.