松果体実質性腫瘍の新しい腫瘍マーカーの開発

松果体实质肿瘤新肿瘤标志物的开发

• 批准号: 09877266
• 负责人: 田中 隆一
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877266/
• 关键词: HIOMT; 松果体実質細胞性腫瘍; 腫瘍マーカー; Hydroxyindole-O-methyltransferase; 松果体実質性腫瘍

これまでに我々は,メラトニン合成酵素の一つで,正常組織では松果体と網膜に特異的に発現しているHIOMT(Hydroxyindole-O-methyltransferase)が松果体実質細胞性腫瘍において高頻度に発現していることを,mRNAレベルで確認し,同蛋白の腫瘍マーカーとしての有用性を強調してきた。今回の萌芽的研究では,HIOMTの発現を蛋白質レベルで検索すべく抗ヒトHIOMT抗体の作製を試みている。平成9年度は,松果体実質細胞性腫瘍におけるHIOMTの発現の有無を,症例を追加してin situhybridization法により検索し,ほとんどの症例においてHIOMT mRNAが発現していることを確認した。さらに,ヒト網膜芽細胞腫細胞株であるY79cellsより抽出したtotal RNAからHIOMT cDNAの全長を合成・精製し,このHIOMT cDNAを発現ベクターに導入し,glutathione-S-transrerase(GST)/HIOMT融合蛋白を作製した。平成10年度に行った研究内容と結果を以下に示す。1. 抗ヒトHIOMT抗体を得るための抗原を作製すべくGST/HIOMT融合蛋白の精製を試みたが,大腸菌からの抽出段階で可溶化が得られなかった。融合蛋白が合成された後にinclusion bodiesが形成されることがその原因と考え,種々の変性剤を使用してその可溶化を試みたが,最終的に水溶性分画に融合蛋白を溶出させることはできなかった。2. 次に,HIOMT cDNAの中で,より親水性の強いアミノ酸を多くコードしている部分を部分的に合成し,昨年度と同様の方法でGST/HIOMT融合蛋白を作製し精製を試みたが,結果は同様であった。3. 現在,HIOMT cDNAの全長,或いは一部をもとに,N末端にhistidine tagを付加した蛋白を合成し,ニッケルカラムで抽出する方法を用いて,抗原の精製を試みているところである。

HIOMT(Hydroxyindole-O-methyltransferase) is a highly frequent expression in pineal stromal tumors in normal tissues, and its mRNA expression is confirmed. The usefulness of HIOMT in pineal stromal tumors is emphasized. This year's budding research will focus on the discovery of HIOMT and the production of anti-HIOMT antibodies. In 2009, the presence or absence of HIOMT in pineal stromal tumors was detected by situhybridization method, and the presence of HIOMT mRNA in pineal stromal tumors was confirmed. In addition, total RNA was extracted from human retinal germ cell line Y79 cells, and HIOMT cDNA was synthesized, purified, and expressed in vitro. Glutathione-S-transferase (GST)/HIOMT fusion protein was produced. The results of the research conducted in 2010 are shown below. 1. Anti-HIOMT antibodies were obtained and the GST/HIOMT fusion protein was purified and solubilized in Escherichia coli. The fusion protein was synthesized and then the inclusion bodies were formed. The fusion protein was dissolved in water. 2. In addition,HIOMT cDNA was synthesized partially, and the GST/HIOMT fusion protein was purified by the same method. 3. Now,HIOMT cDNA full-length, or a part of the middle, N-terminal histidine tag to add protein synthesis, extraction method, antigen purification to try.

项目成果

Tsumanuma I,Tanaka R et al.: "Expression of hydroxyindole-O-methyltransferase(HIOMT)mRNA in pineal parenchymal tumors" Brain Pathology. 7. 1090- (1997)

Tsumanuma I、Tanaka R 等人：“松果体实质肿瘤中羟基吲哚-O-甲基转移酶 (HIOMT) mRNA 的表达”脑病理学。