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鋤鼻系の試験管内再構成とシナプス可塑性

犁鼻系统的体外重建和突触可塑性

基本信息

批准号：
12878154
负责人：
椛秀人
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kochi Medical School
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

嗅球の僧帽細胞と顆粒細胞の間の相反性シナプス伝達及びその可塑性の分子メカニズムを解析するための1つの単純系として、我々は嗅球初代培養系を確立した。妊娠ラットから帝王切開により胎仔を取り出すす。断頭後、胎仔脳から嗅球を取り出し、髄膜を完全に取り除く。嗅球の後背面に位置する副嗅球はマイクロピペットを使ってそれを吸い取る。嗅球を細断し、パパイン(10U/ml)とDNase(0.01%)で処理した後、DNase入り培養液(5%新生仔ウシ血清と5%ウマ血清を含むEME培地)に換え、先端を研摩したパスツールピペットを用いてピペッティングを行う。ポリエチレンイミンでコーティングしたfl 13mmカバーガラスをfl 16mm培養ディッシュにセットして置き、この上に細胞懸濁液を5×10^5〜5×l0^6/cm^2の密度で播種する。約20日程培養すると、自発的なシナプス電流が記録される。通常、僧帽細胞からはグルタミン酸作動性の興奮性シナプス後電流が、顆粒細胞からはGABA作動性の抑制性シナプス後電流が記録される。1.オキシトシンによる相反性シナプス伝達の修飾オキシトシンは主嗅球に作用して母性行動の発現や匂いの記憶学習に関わることが明かとなっている。しかし、オキシトシンの嗅球ニューロンに対する作用のメカニズムは不明であった。我々は、嗅球初代培養系を用いて、オキシトシンが顆粒細胞から僧帽細胞へのGABA作動性シナプス伝達をシナプス前性に抑制するとともに、僧帽細胞から顆粒細胞へのグルタミン酸作動性シナプス伝達をシナプス前及び後性に促進することを明らかにした。2.フェロモンの記憶形成に不可欠なノルアドレナリンの作用機構ノルアドレナリンが副嗅球に作用してフェロモン記憶の形成へと導くが、ノルアドレナリンの作用メカニズムは不明であった。我々は、副嗅球の初代培養系を用いて、ノルアドレナリンが顆粒細胞から僧帽細胞へのGABA作動性シナプス伝達をシナプス前性に抑制することを明らかにした。

We have established a primary culture system of the olfactory bulb to analyze the inverse relationship between mitral cells and granule cells of the olfactory bulb and the molecular membrane of plasticity. The pregnancy was cut open and the fetus was taken out. After decapitation, the fetal olfactory bulb is removed, and the membrane is completely removed. The position of the posterior surface of the olfactory bulb is similar to that of the accessory olfactory bulb. After the olfactory bulb was cut off, DNase (10U/ml) was added to the culture medium (5% newborn serum and 5% EME culture medium). The cell suspension was seeded at a density of 5×10^5 ~ 5× 10^6/cm^2 at 13mm and 16 mm. About 20 days of culture, self-generated and current recording. In general, the current after the activation of GABA in mitotic cells and the current after the activation of GABA in granular cells were recorded. 1. The opposite sex of the olfactory bulb is related to the development of maternal behavior and memory learning. The olfactory bulb is not clear. In this study, we investigated the effects of GABA activation on the growth and development of human olfactory bulb in primary culture system. 2. The mechanism of memory formation in the olfactory bulb is unknown. The primary culture system of the accessory olfactory bulb was used to study the inhibition of GABA activation in granulosa cells and mitotic cells.