Axamノックアウトマウスの作製とその解析

Axam基因敲除小鼠的产生及其分析

• 批准号: 01F00350
• 负责人: 中山 敬一
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01F00350/
• 关键词: Axin; Axam; ノックアウトマウス; SUMO化

体軸形成等の発生分化や発癌に関与するWntシグナル伝達系において中心的な役割を果たす分子群であるβカテニン、APC、GSK-3βというタンパク質と会合するAxinは、さらにAxam(Axin Associated Molecule)という分子に会合する。そこで我々はこのAxamが発生分化のコントロールや発癌に対してどのような作用を有するかを調べるため、Axamノックアウトマウスを作製し、その表現型を調べることを目的としている。ノックアウトマウスは、Axamゲノム遺伝子より機能領域を欠失させるターゲティングベクターを構築した。これをES細胞にトランスフェクションしてAxam遺伝子の相同組換え体をPCRにてスクリーニングする方法を確立し、相同組換えはサザンブロッティングで確認した。そのES細胞をマウス胚盤胞にマイクロインジェクションした。この胚を偽妊娠させた仮親の子宮に移植し、キメラマウスを得、さらにキメラマウスとC57B1/6マウス(野生型)を交配し、Axam遺伝子の一つのアリルが変異したマウス(Axamヘテロノックアウトマウス)を作製し、現在ヘテロマウス同士を交配することによってノックアウトマウスの作製を試みている。また、Axamは、そのC末端側にSUMO化を引き起こす酵素に類似のアミノ酸配列を持つことが明らかになった。そこで、マウスcDNAを哺乳類発現ベクターに組み込み過剰発現によって、SUMO化が促進するかどうか、すでにSUMO化されることが明らかとなっているp53を基質に調べた。また、大腸菌における蛋白産生ベクターにAxamのマウスcDNAを組み込み、大腸菌でAxam蛋白を産生精製することを試みた。この精製蛋白とp53を試験管内で混合することによって、試験管内SUMO化反応の構築を試みた。

Body formation, differentiation, cancer, and Wnt differentiation are related to the molecular groups in the center of the disease, such as the molecular group of β-cuttings, APC, GSK-3 β-cells, the rendezvous of Axin, Axam (Axin Associated Molecule) and molecular rendezvous. I

项目成果

Nakamichi I. et al.: "Formation of Mallory body-like Inclusions and cell death induced by derequlated expression of keratin 18"Mol. Biol. Cell. 13. 3411-3451 (2002)

Nakamichi I. 等人：“角蛋白 18 表达失调诱导马洛里体样包涵体的形成和细胞死亡”Mol。

Kanematsu, T. et al.: "Role of the PLC-related, catalytically inactive protein p130 in GABA_A receptor function"EMBO J.. 21. 1004-1011 (2002)

Kanematsu, T. 等人：“PLC 相关的催化失活蛋白 p130 在 GABA_A 受体功能中的作用”EMBO J.. 21. 1004-1011 (2002)

Shimoda K. et al.: "Tyk2 is required for the induction and nuclear translocation of Daxx which regulates IFN-α-induced suppression of B lvmphocyte formation"J. Immunol. I. 169. 4707-4711 (2002)

Shimoda K. 等人：“Tyk2 是 Daxx 的诱导和核易位所必需的，Daxx 调节 IFN-α 诱导的 B 淋巴细胞形成抑制”J.Immunol.169.4707-4711 (2002)

Masuda T. et al.: "Clinical and biological significance of S-phase kinase-associated protein 2 (Skp2) gene expression in gastric carcinoma : modulation of malignant phenotype by Skp2 overexpression, possibly via p27"Cancer Res.. 62. 3819-3825 (2002)

Masuda T. 等人：“胃癌中 S 期激酶相关蛋白 2 (Skp2) 基因表达的临床和生物学意义：Skp2 过表达调节恶性表型，可能通过 p27”Cancer Res.. 62. 3819-

Ishida N. et al.: "Phosphorylation of p27^<Kip1> on serine 10 is required for its binding to CRM1 and nuclear export"J. Biol. Chem.. 277. 14355-14358 (2002)

Ishida N. 等人：“p27^<Kip1> 在丝氨酸 10 上的磷酸化是其与 CRM1 结合和核输出所必需的”J.