造血幹細胞・血管新生のシグナル伝達をふくむ分子論的研究

造血干细胞信号转导和血管生成等分子研究

• 批准号: 01J00388
• 负责人: 坂本 比呂志
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J00388/
• 关键词: EphB4; 赤血球; チロシンキナーゼ; 細胞接着; c-CBL; CrkL

チロシンキナーゼは血管新生および造血機能においても重要な働きをしている。なかでも、Ephは哺乳類において巨大なチロシンキナーゼファミリーを形成し、各メンバーの遺伝子破壊マウス(KO)は個体発生の段階においてEphが様々な働きをしていることを示している。EphB4 KOおよびそのリガンドであるEphrinB2 KOは血管の形成異常による胎生致死を示す。EphB4は血管内皮細胞のみならず赤血球の発生段階においても、その発現が赤芽球のBFU-Eに一時的に観察される。そこで、我々はEphB4の赤血球産生における役割を検討するために浮遊細胞を用いた検討を行った。GM-CSF依存性赤白血病細胞株UT-7/GMは内因性にEphB4を発現しており、濃度依存的にEphrinB2をコートしたディッシュに接着し、フィロポディアが亢進した。またEphrinB2はフィブロネクチンによる接着を相加的に亢進し、他のEphメンバーで報告されている接着の阻害を示さなかった。さらに、このフィブロネクチンへの接着機能亢進作用は、EphrinB2を可溶化状態で刺激した際にも観察され、細胞内からの細胞接着機能への調節作用が考えられた。そこで内因性にEphB4を発現していないIL3依存性pro-B細胞株Ba/F3に、EphB4の野生型(EphB4wt)および各種変異型を安定発現させた細胞株を樹立した。EphB4wt発現Ba/F3 (EphB4wt/BF)はUT-7/GMと同様にEphrinB2濃度依存的に接着した。この接着は、チロシンキナーゼ活性を失活させた変異型EphB4発現株(EphB4KD/BF)および細胞内領域を欠損させたEphB4発現株(EphB4dC/BF)においても観察された。また、EPhrinB2依存的な接着時のフィロポディアの形成も、EphB4wt、EphB4KDおよびEphB4dCのすべてで認められた。そこで、次にEphB4による細胞内分子の変化を検討した。UT-7/GMにおいて各種分子のチロシンリン酸化とともに、c-Cblのリン酸化は亢進しCrkLと会合した。EphB4wt/BFおよびEphB4KD/BFにおいても、このEphrinB2依存的なCrkLとc-Cblの結合が観察された。以上の結果から、EphB4は、EphrinB2依存的な接着を示し、その接着はEphB4の細胞内領域に依存していないことが示された。

チロシンキナーゼはangiogenesisおよびHematopoietic functionにおいてもimportantな働きをしている.なかでも、EphはMammal において huge なチロシンキナーゼファミリーをformationし、each メンバーの缝子波壊マウス(KO)は Individual 発生の级においてEphが様々な働きをしていることを Show している. EphB4 KO およびそのリガンドであるEphrinB2 KO は vascular abnormal formation に よ る fetal death を show す. EphB4 is used for vascular endothelial cells and red blood cells.そこで, I 々はEphB4のerythroblast production における丒検 するためにplanktonic cells を Use いた検 を行った. GM-CSF-dependent erythroleukemia cell line UT-7/GM is endogenous EphB4 and is concentrated The degree-dependent EphrinB2 をコートしたディッシュに is followed by し, and the フィロポディアが高动した.またEphrinB2はフィブロネクチンによる followed by をAdditional hyperactivityし、His のEphメンバーで report されている and then の hinder をshow さなかった.さらに, このフィブロネクチンへのfollowing hyperfunction は, EphrinB2 soluble form It can stimulate the state of the body and regulate the function of the cells.そこでIntrinsic EphB4 を発appears していないIL3-dependent pro-B cell line Ba/F3に、E The wild type of phB4 (EphB4wt) and various heterotypes have been stably established and cell lines have been established. EphB4wt shows that Ba/F3 (EphB4wt/BF) and UT-7/GM are the same as EphrinB2 concentration-dependently. EphB4 KD/BF The current strain of EphB4 (EphB4dC/BF) in the intracellular domain of および is damaged.また, EphrinB2-dependent なのフィロポディアの forming も, EphB4wt, EphB4KD およびEphB4dC のすべてでcognition められた.そこで, times にEphB4 による intracellular molecules の変化を検した. UT-7/GM において various molecules のチロシンリン acidification とともに, c-Cbl のリン acidification は hyperactivity しCrkL と convergence した. EphB4wt/BF およびEphB4KD/BF においても, このEphrinB2-dependent なCrkL とc-Cbl のcombination が観看された. The above results indicate that EphB4 and EphrinB2 depend on the intracellular domain of EphB4 and EphB4.