成体型造血の多分化能獲得のための血管内皮細胞の機能解析

血管内皮细胞在成人造血中获得多能性的功能分析

• 批准号: 17790652
• 负责人: 坂本 比呂志
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17790652/
• 关键词: c-myb; リンパ球; T細胞; B細胞; 生体型造血; 赤血球

c-mybは成体型造血の発生に必須であり、その遺伝子破壊マウスは成体型造血の不全による貧血で胎生15日前後に致死となる。そこで、このc-Mybの詳細な機能解析を行うためにES細胞のin vitro分化系とテトラサイクリン(Tet)による遺伝子発現系を組み合わせて研究を推進した。c-myb遺伝子破壊ES細胞(c-myb-KO/ES)の血管内皮細胞から成体型造血は全く観察されなかった。そこで、c-myb-KO/ESからc-myb遺伝子発現誘導をテトラサイクリン(Tet)制御下で行えるES細胞(c-myb-Tet/KO)を樹立した。血管内皮細胞以降にc-myb遺伝子発現誘導を行うことにより成体型の血液細胞発生が回復したが、野生型と比較してその成体型血液細胞は巨核球および未成熟な赤芽球の増加となった。本年度はリンパ球系への影響を検討した。OP9ストローマ細胞上では、血管内皮細胞からのB細胞分化が起こるが、細胞delta-ligand 1を強制発現させたOP9ストローマ細胞(OP9-DL1細)では、T細胞の分化が起こる。そこで、このT細胞ならびにB細胞への分化の影響を検討した。血管内皮細胞からのB細胞分化はc-mybの発現調節によって回復できなかった。このB細胞分化の間、IL7Rα鎖陽性の細胞は観察されていない。しかし、T細胞分化においてDN2の細胞集団に分化が停止しており、DPへの分化は観察されていない。しかし、若干のCD8陽性細胞が存在していた。DPの細胞集団が存在していないことから、この集団はT細胞ではないと考えている。このようなc-myb機能をマウス個体で確認することを現在始めている。

C-MYB对于成人造血的发展至关重要，而基因脱离的小鼠是由贫血引起的，是由成年造血的不足引起的，大约15天的胎儿寿命。因此，为了对C-MYB进行详细的功能分析，我们通过使用四环素（TET）将ES细胞的体外分化系统与基因表达系统进行了研究。在C-MYB基因的血管内皮细胞中未观察到成年的造血症（C-MYB-KO/ES）。因此，在四环素（TET）的控制下建立了可以诱导C-MYB-KO/ES的C-MYB基因表达的ES细胞（C-MYB-TET/KO）。血管内皮细胞后C-MYB基因表达的诱导恢复了成年血细胞中血细胞的发育，但与野生型相比，成年血细胞在巨核细胞和未成熟的成熟红细胞中增加。今年，我们检查了对淋巴细胞系统的影响。 B细胞分化发生在来自血管内皮细胞的OP9基质细胞上，但T细胞分化发生在OP9基质细胞（OP9-DL1 THIN）中，这些细胞已被迫表达细胞三角 - 凸起1。因此，研究了分化对T细胞和B细胞的影响。 B细胞与血管内皮细胞的分化未通过调节C-MYB表达来恢复。在此B细胞分化过程中，未观察到IL7Rα链阳性细胞。然而，在T细胞分化过程中，DN2细胞群中的分化已被捕，并且未观察到与DP的分化。但是，存在一些CD8阳性细胞。由于缺乏DP的细胞群，我们认为该人群不是T细胞。我们目前正在开始检查鼠标个体中这种类型的C-MYB功能。