c-Myb reporterマウスを用いた造血幹細胞のシングルセル解析

使用 c-Myb 报告小鼠对造血干细胞进行单细胞分析

• 批准号: 16K09830
• 负责人: 坂本 比呂志
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2017-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16K09830/
• 关键词: 血液幹細胞; c-myb; 転写因子; 前駆血液細胞

先の研究で内在性のc-Mybタンパク質をモニターできるマウス(c-Myb Repoter Mouse)を作成し、血液幹細胞分画でc-Mybの発現量に応じて、HSCの能力の差があることを示した。c-Myb(Low)HSCsは、長期再構築能を示した。また、c-Myb(high)HSCsでは、短期的な再構築能を示した。細胞周期の検討や長期の細胞ラベル実験から、c-Myb(Low)HSCsはDormant-HSCｓにあたるものであることを報告した。そこで本研究では、その遺伝子的な偏りを見出し、Dormat-HSCsを制御するシステムを見出すとともに、その機構は幹細胞システム全体に波及することを期待し、検討した。次世代シークエンサーによる遺伝子発現では、全発現遺伝子を見出すことが可能であるが、その解析には大量のmRNAを必要とし、HSCのような少数の細胞集団からなる幹細胞システムには技術的に難しいと考えられていたが、SMARTerによる増幅で偏りの少ない増幅が可能であるとの知見より、その方法を用いた。また、得られる情報は大量であり、その解析法にも幾つかの方法を検討した（web tool等の発達は、dryを得意としない当方にも解析を可能にした）。その結果、幾つかの遺伝子に大きな差異が見られたが、その内で遺伝子損傷修復遺伝子に着目した。近年、これらの遺伝子群が幹細胞維持に大きな役割を果たすことが明らかとなっている。BATFsの発現がc-Myb(Low/High)HSCsでことなり、mRNAだけでなくタンパク質レベルに置いても、大きく異ることを見出した。

Previous studies have shown that c-Myb repoter mouse (c-Myb Repoter Mouse) is made inherently, the amount of c-Myb produced in blood stem cell fractionation is reduced, and the ability of HSC is different. c-Myb(Low)HSCs are capable of long-term reconstruction. C-Myb(high)HSCs are capable of short-term reconstruction. Cell cycle analysis and long-term cell cycle analysis, c-Myb(Low)HSCs and Dormant-HSCs This study is aimed at exploring the mechanism of stem cell proliferation and the mechanism of stem cell proliferation. The next generation of stem cells was found to be able to analyze a large number of mRNA, and HSC was able to analyze a small number of stem cells. A large amount of information is available, and the analysis method is discussed (web tool, etc.). The result is that there is a big difference between the two. In recent years, stem cells have been maintained in a large number of different genetic subgroups. BATFs are expressed in c-Myb(Low/High)HSCs, mRNA and protein.