DNA酸化傷害バイオマーカーの確立と食品抗酸化成分の機能性への応用の基盤的研究

建立DNA氧化损伤生物标志物并将其应用于食品抗氧化成分功能的基础研究

• 批准号: 01J01765
• 负责人: 河合 慶親
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: The University of Tokushima (2003)Nagoya University (2001-2002)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J01765/
• 关键词: 酸化ストレス; 脂質過酸化反応; DNA傷害; モノクローナル抗体; バイオマーカー; タンパク質修飾

活性酸素により生体成分が酸化されることにより種々の生理活性を有する化合物が生成し、これが多くの疾病の発症や進展に関与していると示唆されている。本研究においては発がん、動脈硬化、糖尿病などの生活習慣病の引き金となりうるDNAやタンパク質の傷害について、酸化ストレスの代表的産物である脂質過酸化産物の関与に焦点を当て研究を進めてきた。低比重リポタンパク質(LDL)に含まれるコレステロールエステルなどを構成する多価不飽和脂肪酸エステルの過酸化産物は、LDLタンパク質(アポB)の修飾を引き起こすことから粥状動脈硬化症の発症に密接に関与していると考えられている。脂質ヒドロペルオキシドである13-HPODEで修飾したタンパク質を抗原として得たポリクローナル抗体を解析したところ、遊離のカルボキシル基を含む新規リジン付加体として見出したN^ε-azelayl-lysine(AZL)がその主要なエピトープであることが明らかとなった。またこの抗体は、アルカリやホスホリパーゼA_2によりエステル切断処理をした酸化LDLやヒト(或いはウサギ)動脈硬化巣に顕著に結合したことから、リン脂質のsn-2位などにエステル結合したAZLの存在が明らかとなった。また、タンパク質に付加したコレステロールエステルを特異的に認識するモノクローナル抗体を作製し、これを用いた検討から酸化LDLや動脈硬化巣においてコレステロールエステル過酸化物由来のタンパク質修飾が起きていることが明らかとなった。また、4-oxo-2-nonenal(ONE)はこれまでに知られている種々のアルデヒド類に比してDNA塩基に対して顕著な反応性を有することが明らかとなった。シトシン残基において生成するOxo-hep-εdC付加体はグアニン残基に生じる付加体に比して仔ウシ胸腺DNA中においてより効率よく生成することがLC-MS/MS分析により明らかとなった。よって、ONEは脂質過酸化由来のDNA傷害において重要な役割を担っている可能性が示唆され、特にシトシン付加体の重要性が考えられた。

Active acid element に よ り raw body composition が acidification さ れ る こ と に よ り kind 々 の physiological activity を have す が る compounds generated し, こ れ が more く の disease の や 発 disease progress に masato and し て い る と in stopping さ れ て い る. This study に お い て は 発 が ん, arteriosclerosis, diabetes な ど の lifestyle disease の lead き gold と な り う る DNA や タ ン パ ク quality の hurt に つ い て, acidification ス ト レ ス の represents the product of で あ る acidification passes lipid product の masato and に focus を as を て research into め て き た. Low density リ ポ タ ン パ ク mass (LDL) contains に ま れ る コ レ ス テ ロ ー ル エ ス テ ル な ど を constitute す る 価 more unsaturated fatty acid エ ス テ ル の は acidification products, LDL タ ン パ ク mass (ア ポ B) の modified を lead き up こ す こ と か ら atherogenic sclerosis の 発 disease に contact に masato and し て い る と exam え ら れ て い る. Lipid ヒ ド ロ ペ ル オ キ シ ド で あ る 13 - HPODE で modified し た タ ン パ ク qualitative を antigen と し て have た ポ リ ク ロ ー ナ ル antibody を parsing し た と こ ろ, free の カ ル ボ キ シ ル base を containing む new rules リ ジ ン FuJiaTi と し て shows し た N ^ epsilon - azelayl - lysine (AZL) が そ の main な エ ピ ト ー プ Youdaoplaceholder0 である とが Ming ら となった となった. ま た こ は の antibody, ア ル カ リ や ホ ス ホ リ パ ー ゼ A_2 に よ り エ ス テ ル cut 処 Richard を し た acidification LDL や ヒ ト (or い は ウ サ ギ) arteriosclerosis 巣 に 顕 the に combining し た こ と か ら, リ ン lipid の sn - two な ど に エ ス テ ル combining し た AZL の is が Ming ら か と な っ た. ま た, タ ン パ ク quality に pay plus し た コ レ ス テ ロ ー ル エ ス テ ル を specific に know す る モ ノ ク ロ ー ナ ル し, the antibody を cropping こ れ を with い た 検 please か ら acidification LDL や arteriosclerosis 巣 に お い て コ レ ス テ ロ ー ル エ ス テ acidification passes ル content origin の タ ン パ ク qualitative modified が up き て い る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, oxo - 2-4 - nonenal (ONE) は こ れ ま で に know ら れ て い る kind 々 の ア ル デ ヒ ド class に than し て DNA salt base に し seaborne て 顕 な anti 応 sex を some す る こ と が Ming ら か と な っ た. シ ト シ ン residues に お い て generated す る Oxo - hep - epsilon dC FuJiaTi は グ ア ニ ン residues に raw じ る FuJiaTi に than し て seed ウ シ thymus DNA に お い て よ り sharper rate よ く generated す る こ と が LC - MS/MS analysis に よ り Ming ら か と な っ た. Acidification passes よ っ て, ONE は lipid origin の DNA damage に お い cut を bear っ て important な service て い が る possibility in stopping さ れ, に シ ト シ ン FuJiaTi の importance が exam え ら れ た.

项目成果

Kawai, Y. et al.: "Immunochemical characterization of a novel lysine adduct using an antibody to linoleic acid hydroperoxide-modified protein."J.Lipid Res.. 44. 1124-1131 (2003)

Kawai, Y. 等人：“使用亚油酸氢过氧化物修饰蛋白的抗体对新型赖氨酸加合物进行免疫化学表征。”J.Lipid Res.. 44. 1124-1131 (2003)

Kawai, Y. et al.: "Formation of acrolein-derived 2'-deoxyadenosine adduct in an iron-induced carcinogenesis model."J.Biol.Chem.. 278. 50346-50354 (2003)

Kawai, Y. 等人：“在铁诱导的致癌模型中形成丙烯醛衍生的 2-脱氧腺苷加合物。”J.Biol.Chem.. 278. 50346-50354 (2003)

Kawai, Y. et al.: "Esterified lipid hydroperoxide-derived modification of protein : formation of a carboxyalkylamide-type lysine adduct in human atherosclerotic lesions."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 313. 271-276 (2004)

Kawai, Y. 等人：“酯化脂质氢过氧化物衍生的蛋白质修饰：在人动脉粥样硬化病变中形成羧烷基酰胺型赖氨酸加合物。”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 313. 271-276 (2004)

Yoshichida Kawai et al.: "Immunohistochemical detection of a substituted 1,N2-ethenodeoxyguanosine adduct by w-6 polyunsaturated fatty acid hydroperoxides in the liver of rats fed a choline-deficient amino acid-defined diet"Carcinogenesis. 23. 485-489 (20

Yoshichida Kawai 等人：“免疫组织化学检测喂养缺乏胆碱的氨基酸限定饮食的大鼠肝脏中 w-6 多不饱和脂肪酸氢过氧化物取代的 1,N2-乙脱氧鸟苷加合物”致癌作用。

Kawai, Y. et al.: "Covalent binding of oxidized cholesteryl esters to protein : Implications for oxidative modification of low density lipoprotein and atherosclerosis."J.Biol.Chem.. 278. 21040-21049 (2003)

Kawai, Y. 等人：“氧化胆固醇酯与蛋白质的共价结合：低密度脂蛋白氧化修饰和动脉粥样硬化的影响。”J.Biol.Chem.. 278. 21040-21049 (2003)