染色体凝縮に必須な分裂酵母コンデンシンの活性制御機構の解明

阐明染色体浓缩所必需的裂殖酵母浓缩蛋白的活性控制机制

• 批准号: 01J03159
• 负责人: 湯浅 達朗
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J03159/
• 关键词: 分裂酵母; 染色体凝縮; コンデンシン; セパレース; セキュリン; 分子生物学

我々の研究室では、真核生物のM期の染色体均等分配について研究を行っており、これまでに分裂酵母を用いて、染色体凝縮に必須なコンデンシン、染色体分離に必須なセパレースとセキュリンの各員電子産物の性質を明らかにしてきた。これらの機能をより深く理解するため、我々はこれまでにない新しいスクリーニング方法「Brute force strategy B」を考案し、セパレース・セキュリンとコンデンシンに適応した。具体的な方法は、まずおよそ1000株からなる分裂酵母の高温感受性変異体ライブラリーを構築し、その中に含まれる株全てに、セパレースなどを大量発現する多コピープラスミドを網羅的に導入し、生育の変化を記述するのである。そして差が見られた株について、その原因遺伝子をクローニングする。その原因遺伝子と、セパレースなどは、何らかの相互作用をするものと期待される。この方法により、我々は52株で何らかの生育の差を見いだした。そして、そのほとんど全てで、原因遺伝子(あるいは可能性が非常に高い遺伝子)を単離することができた。これらの中には、セパレース(Cut1)とコンデンシンサブユニット(Cut14)自身の変異体も複数含まれていた。もしこれらが既存の変異体と違った性質を示せば、セパレースとコンデンシンの機能の解明に役立つであろう。また、Cut14の大量発現で生育が悪くなる株の中には、意外にもDNAポリメラーゼαの変異体が含まれていた。さらに、セパレース・セキュリンの大量発現によって生育が悪くなる株が18株取得され、それらの中には姉妹染色分体合着因子コヒーシンや、セキュリン・サイクリンBの分解に必須なユビキチンリガーゼであるAPC/C複合体と26Sプロテアソーム局在化因子Cut8の変異体、さらには複数の転写因子、そして細胞骨格の維持に必須であると思われるTor複合体のサブユニットの変異体が含まれていた。これらの結果は、コンデンシンとセパレース・セキュリンの、これまでに知られていなかった機能の解析において、大きな助けとなることが期待される。

In our laboratory, we have conducted research on chromosome equalization in M phase of eukaryotes, including the use of mitotic yeast, the need for chromosome condensation, and the need for chromosome separation. The function of this system is explained in detail in the following way: "Brute force strategy B" is considered to be a new method for solving problems. The specific method includes constructing high temperature sensitive mutant strains of split yeast from more than 1000 strains, describing the introduction of multiple strains of split yeast and their fertility. The reason for the difference is that it is not easy to see the difference between the two. The reason for this is that the interaction between the two is expected. The method of birth is different from that of 52 plants. The reason for this is that the probability of death is very high. In the middle of the game, there are two different kinds of games: (Cut1) and (Cut14). The nature of the existing variant is shown in the table below. The function of the variant is explained in the table below. A large number of plants have been produced in the middle of the plant, and unexpected DNA has been produced in the middle of the plant. 18 strains were obtained, and all of them were obtained. The combination factor of the chromosome and the chromosome was determined. The APC/C complex and the 26S complex were obtained. The combination factor of the chromosome and the chromosome was determined. It is necessary to maintain the cellular structure. The results of this study are as follows: (1) The analysis of the function of the system is expected to be completed.

项目成果

松村拓洋, 湯浅達朗, 林武志, 小原隆之, 木全諭宇, 柳田充弘: "A brute force post genome approach to identify temperature-sensitive mutataions that negatively interact with separase and securin plasmids"Genes to Cells. 8巻4号. 341-355 (2003)

Takuhiro Matsumura、Tatsuro Yuasa、Takeshi Hayashi、Takayuki Ohara、Yu Kimata、Mitsuhiro Yanagita：“用于识别与分离酶和 securin 质粒产生负面相互作用的温度敏感突变的强​​力后基因组方法”《Genes to Cell》第 8 卷 4 第 341 期。 -355 (2003)