アフリカツメガエルの卵抽出液を用いた染色体凝縮機構の解析
利用非洲爪蟾卵提取物分析染色体浓缩机制
基本信息
- 批准号:14026059
- 负责人:
- 金额:$ 1.92万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
- 财政年份:2002
- 资助国家:日本
- 起止时间:2002 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
細胞分裂期(M期)における染色体凝縮は、親細胞から娘細胞への遺伝情報の正確な伝達に重要であり、この機構の欠陥は遺伝情報の不正確な分配、ひいては突然変異や発がんに直結する。本研究では、染色体凝縮の分子基盤を理解するために、ツメガエル卵抽出液を用いた染色体高次構造のin vitro再構成系を用いて、染色体凝縮に重要な因子の同定を試みた。さらに、ヒストンH3のリン酸化と染色体凝縮の関係を解析した。現在までに知られている染色体凝縮に必須なタンパク質は、DNAトポイソメラーゼIIとSMCタンパク質複合体であるコンデンシンのみである。我々は新規の染色体凝縮タンパク質を精製するために、ツメガエル卵抽出液をQセファロースで分画した。染色体凝縮に重要なタンパク質は4つの画分に分離された。最も高塩濃度で溶出された画分を更に精製すると、ヌクレオプラスミン、TAF1βの酸性シャペロンが精製された。現在、残りの3つの画分に存在する染色体凝縮因子の同定と、これらの酸性タンパク質がこの系でどのようなメカニズムで染色体凝縮に働くか解析中である。ヒストンH3の染色体凝縮における役割を調べるために、M期卵抽出液からヒストンH3のリン酸化酵素の候補であるaurora B kinaseを免疫除去して、これにツメガエル精子核を加え、ヒストンH3のリン酸化状態と精子核の形態変化を観察した。aurora B kinaseを免疫除去すると精子核DNA上のヒストンH3のリン酸化が消失した。また、コンデンシンの精子核DNAへの結合は約50%減少した。しかし、ヒストンH3のリン酸化が観察されないこの条件下でも染色体の凝縮は観察された。この結果は、ヒストンH3のリン酸化は染色体凝縮には関係ない可能性を支持するが、コンデンシンの結合が減少した点に注目し解析を進めたい。
Chromosome condensation during cell division (M phase), correct transmission of genetic information from parent cells to mother cells, incorrect distribution of genetic information from organ, and sudden change in genetic information are important. In this study, we try to understand the molecular basis of chromosome condensation and determine the identity of important factors in chromosome condensation. Analysis of the relationship between chromosome condensation and acidification of H3. Now we know that chromosome condensation is necessary for DNA synthesis and SMC synthesis. The new method of chromosome condensation and purification is described in detail below. Chromosome condensation is an important factor in chromosome segregation. The highest concentration of soluble compounds was purified by HPLC. The highest concentration of soluble compounds was purified by HPLC. The highest concentration of soluble compounds was purified by HPLC. Now, there are three kinds of chromosome condensation factors in the analysis of chromosome condensation factors. H3 chromosome condensation is regulated by the enzyme aurora B kinase, which is a candidate for H3 chromosome acidification. aurora B kinase is removed by immunotherapy, and H3 protein in sperm nucleus DNA disappears. The binding of sperm nuclear DNA was reduced by about 50%. Under these conditions, chromosome condensation is observed. The result is that the concentration of H3 in the chromosome is higher than that in the chromosome.
项目成果
期刊论文数量(2)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Bazett-Jones, D.P., Kimura, K., Hirano, T.: "Efficient supercoiling of DNA by a single condensin complex as revealed by electron spectroscopic imaging"Molecular Cell. 9. 1183-1190 (2002)
Bazett-Jones, D.P.、Kimura, K.、Hirano, T.:“通过电子光谱成像揭示的单个凝缩蛋白复合物对 DNA 的有效超螺旋”《分子细胞》。
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