有機アニオン輸送担体の発現調節機構及び遺伝的多型の解析

有机阴离子转运载体表达调控机制及遗传多态性分析

基本信息

批准号：
01J06392
负责人：
高田龍平
金额：
$ 1.92万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J06392/
关键词：
有機アニオントランスポーター発現調節

项目摘要

小腸上皮細胞、肝実質細胞、腎尿細管上皮細胞などの極性細胞においては、各種トランスポーターはapicalあるいはbasolateral側膜に局在し、輸送基質の経細胞輸送に関与している。遺伝子変異や病態などによる局在の異常は、in vivoにおける輸送機能の消失を引き起こすものであることから、細胞膜への局在機構の解明は重要な研究課題の一つとなる。平成15年度には、これらの細胞に発現するABCトランスポーターの一つ、Breast Cancer Resistance Protein (BCRP/ABCG2)のapical側膜上への選択的ソーティング機構に焦点をあて、種々の検討を行った。極性細胞であるLLC-PK1細胞でhuman BCRPの発現系を作成したところ、生理的な配向性であるapical側膜での発現が見られ、N型糖鎖およびジスルフィド結合の存在が確認された。N型糖鎖・ジスルフィド結合形成の変異体や、BCRPの細胞内ドメインのペプチド配列の一部を欠如した種々の変異体をsite-directed mutagenesisなどの手法で作成し、解析を行った結果、BCRPのLLC-PK1細胞におけるアピカル側膜上での発現には、N型糖鎖の存在の有無は影響しないものの、ジスルフィド結合および細胞内ドメインの一部の配列の存在が必要であることが明らかとなった。この細胞内ドメインの配列は他の部分と比べ種間でよく保存されており、重要性を示唆するものと考えている。

在极性细胞（例如小肠上皮细胞，肝病细胞和肾小管上皮细胞）中，各种转运蛋白位于根尖或基底外侧膜上，并参与运输底物的跨细胞运输。由于由于遗传突变和病理学引起的定位异常导致体内转运功能的降低，因此阐明了对细胞膜的定位机制是重要的研究主题之一。 2003年，进行了各种研究，重点是乳腺癌抗性蛋白（BCRP/ABCG2）的选择性分选机制，这是在这些细胞中表达的ABC转运蛋白之一，在顶端膜上。当在极地细胞的LLC-PK1细胞中创建人BCRP表达系统时，观察到它是在生理方向的顶端膜中表达的，并且确认了N型聚糖和二硫键键的存在。使用诸如位置定向诱变的技术创建了形成N型糖/二硫键和各种突变体的突变体，这些突变体是BCRP细胞内结构域的一部分肽序列的，并且分析表明，尽管N型Glycans的存在或不存在BCRP在bcrp的表达中的存在或不存在。键和细胞内结构域的一部分是必要的。该细胞内结构域的序列在物种之间比其他部位更保守，并且被认为暗示了重要性。