OSTα/βの薬物・内因性物質の輸送特性および発現調節機構の解析

OSTα/β的药物/内源性物质转运特性及表达调控机制分析

基本信息

批准号：
17790114
负责人：
高田龍平
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

Organic solute transporter(OST)α/βは、小腸での高い発現・FXR/RXRαによる発現制御の可能性から、小腸血管側膜における硫酸抱合体・胆汁酸トランスポーターであることが期待される。本研究課題は、OSTα/βの輸送特性および発現特性の解析を行い、生理的機能および輸送基質の体内動態への寄与を解明することを目的としている。本年度は、OSTα/β遺伝子発現細胞系を用いた輸送実験、および、OSTα/βの転写調節機構の詳細な解析を行った。昨年度までに得られた非極性細胞(HEK293細胞)・極性細胞(MDCK細胞)へのOSTα/β遺伝子安定発現株を用い、[^3H]タウロコール酸の輸送実験を行った結果、OSTαとOSTβを同時発現した場合に有意な細胞内取り込み活性の上昇が見られた。これらの細胞におけるトランスポーター蛋白の発現はウェスタンブロットにより確認され、免疫染色の結果、同時導入時において細胞膜上での発現が観察された。転写調節に関しては、5'-上流域を用いたレポータージーンアッセイ・ゲルシフトアッセイの結果により、FXR/RXRα/ケノデオキシコール酸(FXRリガンド)による発現制御はOSTα・OSTβの上流に存在するIR-1配列を介した直接的なものであることが明らかとなった。また、LXRα/RXRα/TO-901317(LXRリガンド)によってもOSTα・OSTβは発現誘導されることが示され、この誘導はFXR/RXRαと同じIR-1配列を介したものであることが見出された。LXRリガンドによるOSTα/βの発現誘導は、内因性のOSTα/β(in vitro(Caco-2細胞)・in vivo(マウス小腸))においても確認されており、胆汁うっ滞等の遺伝性疾患の治療にも結びつきうる臨床的にも重要な知見であると考えられる。

有机可溶性转运蛋白（OST）α/β有望在小肠的血管膜中是硫酸盐结合物和胆汁酸转运蛋白，因为它在小肠中高度表达，并且可以由FXR/RXRα调节。该研究主题旨在分析OSTα/β的运输和表达特征，并阐明运输底物对Pirai的生理功能和贡献。今年，我们使用表达OSTα/β基因的细胞系进行了运输实验，并对OSTα/β的转录调节机制进行了详细分析。使用稳定的菌株表达OSTα/β基因到去年获得的非极性细胞（HEK293细胞）和极性细胞（MDCK细胞）中，我们进行了[^3H]牛胆酸的转运实验，并且在共表达OSTα和OSTβ时，会显着增加胞内外电效应。通过蛋白质印迹证实了转运蛋白在这些细胞中的表达，免疫染色表明在共同引入后观察到细胞膜上的表达。关于转录调控，使用5'上游区域的报告基因测定法和凝胶移位测定结果表明，FXR/RXR/RXRα/Chenexyoxycholic酸（FXR配体）的表达控制直接通过IR-1序列，而IR-1序列是OSTα和OSTα和OSTβ上游的IR-1序列。还表明，OSTα・OSTβ的表达是由LXRα/RXRα/TO-901317（LXR配体）诱导的，并且发现该诱导是通过与FXR/RXRα相同的IR-1序列。在内源性OSTα/β（体外（CACO-2细胞）和体内（小鼠小肠））中也证实了LXR配体诱导OSTα/β表达，并且被认为是临床上重要的发现，也可以与诸如胆汁固醇等遗传疾病的治疗相关。