Dynein and kinesin receptors of Herpes Simplex Virus Type 1

1 型单纯疱疹病毒的动力蛋白和驱动蛋白受体

基本信息

  • 批准号:
    5311770
  • 负责人:
  • 金额:
    --
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    德国
  • 项目类别:
    Priority Programmes
  • 财政年份:
    2001
  • 资助国家:
    德国
  • 起止时间:
    2000-12-31 至 2005-12-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

Herpes Simplex Virus Type 1 (HSV1) is an enveloped double-stranded DNA virus which enters cells by fusion with the plasma membrane. The incoming viral capsids are transported along microtubules (MT) to the host nucleus using cytosolic dynein, a minus-end directed motor ATPase. The capsids are ultimately targeted to the nuclear pores where the viral genome is injected into the nucleoplasm prior to viral transcription and replication. During virus assembly and egress, outgoing cytosolic capsids are anterogradely transported along MTs but this time possibly Using videomicroscopy, we have developed an in vitro motility assay consisting of purified capsids containing a capsid protein fused to fluorescent proteins (GFP/VP26 or CFP/VP26), Cy3-labeled MTs, cytosol and an ATP regenerating system. Exploiting this system as well as our in vivo assays, we will determine the molecular determinants of the viral capsids required for MT transport. Using a recombinant BAC-vector (bacterial artificial chromosome) encoding the entire HSV1 genome, we will generate stystematicaly specific mutants of HSV1. These mutants and existing deletion mutants of structural viral proteins will be tested for their ability to move along MTs as well as for the directionality of. In contrast to other cargo transported along MTs, the protein composition of this one is known (about 20 candidates). It therefore serves as an excellent model to identify in a minimal functional proteomics approach putative motor receptors. Moreover, dependent of the stage of the viral life cycle and the cellular context, the viral capsid can be transported to the minus-end or to the plus-end of MTs. We will use this system to analyse the requirements for binding and activation of different MT motors as well as the control of transport direction.
1 型单纯疱疹病毒 (HSV1) 是一种有包膜的双链 DNA 病毒,通过与质膜融合进入细胞。使用胞质动力蛋白(一种负端定向运动 ATP 酶)将传入的病毒衣壳沿着微管 (MT) 转运至宿主细胞核。衣壳最终靶向核孔,在病毒转录和复制之前,病毒基因组被注入核质。在病毒组装和排出过程中,传出的胞质衣壳沿着 MT 顺行运输,但这次可能使用视频显微镜,我们开发了一种体外运动测定,由纯化的衣壳组成,其中含有与荧光蛋白融合的衣壳蛋白(GFP / VP26或CFP / VP26),Cy3标记的MT,胞质溶胶和 ATP再生系统。利用该系统以及我们的体内测定,我们将确定 MT 运输所需的病毒衣壳的分子决定因素。使用编码整个 HSV1 基因组的重组 BAC 载体(细菌人工染色体),我们将生成 HSV1 的系统特异性突变体。这些突变体和现有的结构病毒蛋白缺失突变体将测试它们沿着 MT 移动的能力以及方向性。与沿 MT 运输的其他货物相比,该货物的蛋白质组成是已知的(大约 20 种候选物质)。因此,它是一个极好的模型,可以用最小的功能蛋白质组学方法识别推定的运动受体。此外,根据病毒生命周期的阶段和细胞环境,病毒衣壳可以被转运到MT的负端或正端。我们将利用该系统来分析不同MT电机的绑定和激活以及传输方向控制的要求。

项目成果

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