Mikrotubuli-vermittelter Transport von Herpes Simplex Virus Kapsiden

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Herpes Simplex Virus Typ 1 (HSV 1) ist ein behülltes Virus, das für den Eintritt in die Zelle mit deren Plasmamebran fusioniert. Dynein und Dynactin vermitteln den Transport der viralen Kapside entlang von Mikrotubuli (MT) zum Zellkern. die Kapside binden an die Kernporen, um das virale Genom für die Transkription und Replikation in den Zellkern zu injizieren. Zytosolische Kapside werden vermutlich auch während der Virusausschleusung entlang von MT zum Ort der Membranumhüllung transportiert. Dabei scheint der Zelltyp zu bestimmen, ob Dynein für den Transport zum Trans-golgi-Netzwerk und frühen Endosomen oder Kinesin für den axonalen Transport in Neuronen zur präsynaptischen Plasmamembran verwendet wird. Mit Hilfe einer fluoreszenzmarkierten Virusmutante, die ein Fusiosprotein aus dem green-Fluorescent-Protein und dem Kasidprotein VP26 enthält, untersuchen wir den MT-Transport videomikroskopisch in lebenden Epithelzellen und Neuronen, die auch im menschlichen Wirt infiziert werden. Um die viralen und zellulären molekularen Determinanten dieses Transportes zu analysieren, haben wir einen biochemischen Versuchsansatz entwickelt in dem zum ersten Mal ein viraler zytoplasmatischer Transport in vitro rekonstruiert wurde. Mit diesen beiden Systemen können wir nun die molekularen Interaktionen zwischen den viralen und zellulären Strukturen während des MT-Transportes von HSV1 Kapsiden bestimmen. Die Proteinzusammensetzung diser Kapside ist vergleichsweise einfach und genetisch, biochemisch und strukturell charakterisiert. Aus diesem Grund ist die Analyse des viralen Kapsidtransportes sehr gut geeignet, die strukturellen Determinanten sowie die Regulierung dieses MT-vermittelten Transportes zu untersuchen.