アポトーシス細胞死を制御するDNAポリメラーゼζの細胞生存因子としての機能解析

DNA 聚合酶 z 作为控制细胞凋亡的细胞存活因子的功能分析

• 批准号: 13043048
• 负责人: 梶原 景正
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13043048/
• 关键词: DNAポリメラーゼζ; 損傷乗り越えDNA合成; アポトーシス; ノックアウトマウス; トランスジェニックマウス; Sez4遺伝子

多細胞真核生物に特徴的なアポトーシス細胞死におけるDNAポリメラーゼζ(polζ)の役割を、その触媒サブユニットをコードするSez4遺伝子の変異マウスを用いて解析した。(1)アルキル化剤・抗癌剤などによるDNA損傷に対し、polζの関わるTLS活性をSez4抗体を用いて組織化学的に検討した。Sez4蛋白質は、アルキル化剤投与後6-24時間で核内にスポット状の陽性シグナルとして認められ、PCNAや取り込まれたBrdUの局在と一致していた。(2)Sez4トランスジェニックマウス(Sez4[tg/tg])由来の線維芽細胞は、野生型およびヘテロ型Sez4ノックアウトの細胞と比較してアルキル化剤によるDNA損傷に対し、生存効率が約2倍に上昇したが、BrdU取り込みを指標としたS期の割合はtg細胞と野生型細胞では変化なかった。以上のことから、DNA損傷をもったSez4[tg/tg]細胞がM期の進行が可能となり細胞死を回避できたが、G1期チェックポイントにより細胞周期を停止していることが示唆される。またSez4ノックアウトで認められる細胞死はp53非依存性であるが、Sez4[tg/tg]マウスにはp73欠失マウスで認められる低成長・水頭症が認められた。従って、polζのTLS活性とp73活性との相互作用によりDNA損傷をもった細胞の生存が決定され、正常な形態形成が営まれると考えられる。(3)Sez4 mRNAに相補的な2重鎖RNAを線維芽細胞へ導入し、DNA損傷に対する感受性が上昇したが、現時点ではマウス組織への導入による形態的変化は認められていない。(4)既に作製したヘテロ型Sez4ノックアウトES細胞に、Cre-loxPシステムを用いたターゲティングベクターを導入し、クローニングしている段階である。

The characteristics of polycytic eukaryotes, such as cell death, cell death, DNA, pol ζ (pol ζ), catalysis, catalysis, Sez4, cell death, and so on. (1) Anticancer drugs, anti-cancer drugs, DNA antibodies, pol antibodies, TLS activity, Sez4 antibodies were detected by histochemical staining. After 6-24 hours, Sez4 protein and protein were injected into the nuclei. In the following 6-24 hours, there was no significant difference between the two groups. After 6-24 hours, there was no significant difference between the two groups. PCNA was detected in the same way as that of BrdU. (2) Sez4 spores were isolated from the germ cells (Sez4 [TG

项目成果

Kajiwara, K. et al.: "Sez4 gene encoding an elongation subunit of DNA polymerase zeta is required for normal embryogenesis"Genes to Cells. 6. 99-106 (2001)

Kajiwara, K. 等人：“正常胚胎发生需要编码 DNA 聚合酶 zeta 延伸亚基的 Sez4 基因”Genes to Cells。

O-Wang, J. et al.: "DNA polymerase kappa, implicated in spontaneous and DNA damage-induced mutagenesis, is overexpressed in lung cancer"Cancer Research. 61. 5366-5369 (2001)

O-Wang, J. 等人：“DNA 聚合酶 kappa 参与自发突变和 DNA 损伤诱导的突变，在肺癌中过度表达”癌症研究。