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神経細胞のカルシウムシグナル調節物質の同定

神经元钙信号调节剂的鉴定

基本信息

批准号：
06771646
负责人：
梶原景正
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々はペンチレンテトラゾール(PTZ)投与によるけいれん刺激により、マウス脳で発現量の変化する遺伝子cDNAを系統的にクローニングした。スクリーニングされたcDNAクローンのうちSEZ-17はPTZによるけいれん刺激でそのmRNAレベルが一過性に減少するものであり、in vitroにて調製されたSEZ-17転写産物(SEZ-17RNA)を注入したゼノパス卵母細胞は、細胞外液にPTZを投与すると緩やかな内向き応答電流を示し、種々のチャネル阻害実験によりこの内向き電流が細胞外カルシウムイオンの流入であることが予想された。そこでSEZ-17RNAを注入したゼノパス卵母細胞の細胞外液にカルシウム結合性蛍光指示剤(Indo-1,Fluo-3)を投与し、共焦点レーザー顕微鏡を用いてPTZ刺激による細胞外カルシウムイオンの流入を細胞生物学的に検討したところ、SEZ-17RNAを注入した卵母細胞では、PTZ投与後経時的に蛍光応答即ち細胞外カルシウムの流入が増加し、さらに流入したカルシウムイオンは細胞膜付近に集積していることが認められた。我々はSEZ-17がコードしている8kDaのアミノ酸配列から2種類のポリクローナル抗体を調製しウエスタンブロットを行ったところ、2種類とも32kDaの蛋白質を同定したが8kDaの蛋白質を同定することはできなかった。同時に行った脳切片での免疫組織化学的検討結果とSEZ-17RNAをプローブとしたin situハイブリダイゼーションの結果とが一致していたことから、SEZ-17がコードする蛋白質がダイマー構造をとっているかまたは、何らかの物質と結合している可能性が考えられる。現在、SEZ-17RNAを注入したゼノパス卵母細胞を用いた免疫沈降実験により32kDaの蛋白質が同定できるかどうか検討中である。

We are looking forward to the next step in the development of a gene expression system called PTZ (PTZ). SEZ-17 is a protein that can be expressed in a variety of ways, such as in a variety of ways.(SEZ-17RNA) is injected into the oocyte, and the extracellular fluid is injected into the oocyte. SEZ-17RNA is injected into the extracellular fluid of oocytes, and a combination of light indicators is used.(Indo-1,Fluo-3) RNA injection into oocytes with PTZ stimulation and extracellular matrix influx with confocal microscopy. The cell membrane is close to the cell membrane. The SEZ-17 protein is composed of 8kDa and 8 kDa amino acids. The SEZ-17 protein is composed of 2 kinds of amino acids. The SEZ-17 protein is composed of 2 kinds of amino acids. At the same time, the results of immunohistochemical analysis of SEZ-17RNA were consistent with those of SEZ-17 RNA in situ. Now, when SEZ-17RNA is injected into the oocytes and used for immune sedimentation, the 32kDa protein becomes constant and stable.