高機能チップを用いた細胞機能解析システムの構築

利用高性能芯片构建细胞功能分析系统

• 批准号: 13202019
• 负责人: 福沢 世傑
• 金额: $ 2.56万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13202019/
• 关键词: 古細菌; エーテル脂質; カルドアーキオール; 人工細胞膜; 膜タンパク質; 自己組織化膜

古細菌のエーテル脂質カルドアーキオールを簡略化したモデルを設計し、C21のアルキル鎖の両端をトリエチレングリコールで修飾し、一端をスルフヒドリル化した人工細胞膜の合成を行った。基本的にはこれまでやってきた11-ブロモウンデセンとトリエチレングリコールを出発原料とし、DMF中NaHでアルコキシドを発生させて縮合後、水酸基を保護した後にWittig反応で炭素-炭素結合を形成した。続いて一端をチオアセチル化し、脱保護し、人工細胞膜の構成成分であるPEGアルカンチオールを合成した。合成したPEGアルカンチオールは2mMのエタノール溶液とし、金薄膜を蒸着したガラスチップを浸漬することで自己組織化膜を形成させた。このチップをXPSと大気中AFMにより表面を観察することによって自己組織化膜の確認をした。またこの膜構成成分を用いて基板上で膜タンパク質を再構成させることができるかどうか検討するために、緩衝液中でリポソームを形成させることができるかどうかを試みた。しかし、溶解性も悪くリポソームの構成ができなかったので、末端の水酸基のリン酸化を試みている。膜タンパク質としては古細菌のエネルギー変換装置であるバクテリオロドプシンを選択し、サントリー生物有機化学研究所よりその産生株の譲渡を受け、培養系を立ち上げた。

Archaea の エ ー テ ル lipid カ ル ド ア ー キ オ ー ル を briefly turn し た モ デ ル を design し, C21 の ア ル キ ル lock の struck the を ト リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル で modified し, end を ス ル フ ヒ ド リ ル change し た artificial membrane の synthetic line を っ た. Basic に は こ れ ま で や っ て き た 11 - ブ ロ モ ウ ン デ セ ン と ト リ エ チ レ ン グ リ コ ー ル を out 発 materials と し, NaH in DMF で ア ル コ キ シ ド を 発 raw さ せ て condensation, water, acid base を protection after し た に after Russia vw sales chief detlef Wittig anti 応 で carbon - carbon combined を form し た. 続 い て end を チ オ ア セ チ ル し and protect し, composition of artificial cell membrane の で あ る PEG ア ル カ ン チ オ ー ル を synthetic し た. Synthetic し た PEG ア ル カ ン チ オ ー ル は 2 mm の エ タ ノ ー ル solution と し, gold film を steamed し た ガ ラ ス チ ッ プ を dipping す る こ と で を yourself organized membrane formation さ せ た. <s:1> チップをXPSと in the air AFMによ surface を観 examination する とによって とによって とによって とによって self-organizing membrane <s:1> confirmation を た た. ま た こ の membrane composition を with い て substrate で membrane タ ン パ ク qualitative を reconstitution さ せ る こ と が で き る か ど う か beg す 検 る た め に, buffer で リ ポ ソ ー ム を form さ せ る こ と が で き る か ど う か を try み た. し か し, solubility も 悪 く リ ポ ソ ー ム の constitute が で き な か っ た の で, end の water acid radical の リ ン acidification を try み て い る. Membrane タ ン パ ク qualitative と し て は archaea の エ ネ ル ギ ー variations in device で あ る バ ク テ リ オ ロ ド プ シ ン を sentaku し, サ ン ト リ ー institute of bioorganic chemistry よ り そ の produce strain の 譲 crossing を け, cultivate を made ち fasten げ た.