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好酸好熱古細菌のエーテル脂質合成系酵素の研究

嗜酸古菌醚脂合成酶的研究

基本信息

批准号：
04F04451
负责人：
山岸明彦
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo University of Pharmacy and Life Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

研究対象として全ゲノム配列がすで解読され報告されている二つの古細菌の種(Methanocaldococcus jannashiiとThermoplasma acidophilum)を選んだ。まず、報告されたゲノム配列の中に目的とする酵素digeranylgerallylglycerylphosphate synthetase(DGGGPS)の遺伝子があるかどうかを検索したところ、それらしき遺伝子としてMJ0279とTA0996という番号のついている二つの遺伝子を発見した。そこで、その遺伝子を染色体DNAからPCR(試験管内遺伝子増幅)で増幅した。増幅した遺伝子を大腸菌内蛋白質発現用のベクターにクローニングした。そのベクターを用いて大腸菌細胞内で遺伝子にコードされた蛋白質の大量発現を行った。次いで、二つの古細菌の二つの遺伝子の内、発現量の多かったMJ0279に関して酵素の精製を行った。まず、大腸菌体を超音波破砕し細胞膜画分を得た。細胞膜画分をβオクチルグルコシドで処理することで、大腸菌細胞膜内に発現していた酵素蛋白質DGGGPSを可溶化した。可溶化した溶液を熱処理することにより大腸菌由来の蛋白質を熱変性させて除去した。その後、DEAE、ResourceQ,ハイドロキシアパタイトのカラムを通すことによりDGGGPS蛋白質を精製することに成功した。酵素蛋白質の酵素活性等の諸性質を決定することに成功した。DGGGPSは30kDaのペプチド鎖一本よりなる単量体分子で、その活性の至適温度は70℃、至適pHが6.0であることが分かった。

To study the distribution of two Methanocaldococcus jannashii strains of archaea (Methanocaldococcus jannashii archaea, etc.) The purpose of this article is to read the enzyme digeranylgerallylglycerylphosphate synthetase (DGGGPS), the enzyme, the enzyme, the enzyme, The chromosome DNA, the PCR, the width, the size, the size, the The contents of the protein in the fungus were used to treat the bacteria. A large amount of protein was detected in the cells of the bacteria. Second, second, The cell membrane of the bacteria was broken by ultrasonic wave and the cell membrane was obtained. The cell membrane painting was divided into three parts: β-cytomembrane, β-lactamase, β-cytomembrane, β-cytomembrane, enzyme protein, DGGGPS, soluble enzyme. The soluble solution was used to analyze the origin of the bacteria, the protein, the sex and the removal of the bacteria. After the treatment, DEAE, ResourceQ, and others said that they were successful. The enzyme protein, enzyme activity and other characteristics determine the success of the enzyme. DGGGPS, 30kDa, weight, molecule, activity, temperature, pH, activity, temperature, temperature,