発作性失調症2型モデルマウスの作製と遺伝子治療の試み

阵发性共济失调2型小鼠模型的建立及基因治疗的尝试

• 批准号: 13210051
• 负责人: 三枝 弘尚
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13210051/
• 关键词: Cav2.1チャネル; 発作性失調型2型; ノックインマウス; 遺伝子治療

本研究はP/Q型Caチャネルをコードするaipha1A遺伝子の変異に起因する発作性失調症2型(以下EA2)のモデルマウスの作製を目的とし、それを用いたEA2発症機序の解明およびその遺伝子治療法の開発を目指すものである。まず、すでに我々がクローン化した正常ヒト由来alpha1A cDNAにPCRを利用してEA2変異(C4110T, R1279がStopコドンになる)を導入した(EA2-alpha1A)。このEA2-alpha1A cDNAをマウスalpha1A遺伝子の内在性プロモーターで発現させることを目指し、Cre-lox系を利用してマウス胚幹細胞(ES細胞)のalpha1A遺伝子エクソン1に挿入することを試みた。これは、変異導入lox配列(lox71およびlox66)間のCreによる組換え反応は、本来の認識配列であるloxP-loxP間の組換え反応にくらべて逆反応が起こりにくいということに基づく方法で、染色体上の特定の位置に外来遺伝子を効率的に挿入できると考えられる。lox66,EMCV由来IRES, EA2-alpha1A cDNA, polyAシグナル、ハイグロマイシン耐性遺伝子カセット、を含むノックインベクターを作製し、これをマウスalpha1Aエクソン1にlox71配列が挿入されたES細胞(BI-176)にCre発現ベクターとともに導入した。その結果、ハイグロマイシン耐性株の約30%という高い効率で目的のEA2ノックインES細胞が得られた。そして常法に従いEA2ノックインマウスを作製した。また、親株であるBI-176細胞に導入した変異はalpha1A遺伝子のヌル変異であると期待されるので、EA2変異との比較を可能にするためBI-176由来マウスも作製した。現在はこれらのマウスの交配によりホモ接合体が得られることが判明した段階であり、今後それらの行動学的、病理学的な解析をすすめる予定である。

This study は P/Q type Ca チ ャ ネ ル を コ ー ド す る aipha1A posthumous son 伝 の - cause different に す る 発 for sexual disorders in type 2 (EA2) の モ デ ル マ ウ ス の cropping を purpose と し, そ れ を with い た EA2 発 disease machine sequence の interpret お よ び そ の heritage 伝 child therapy の open 発 を refers す も の で あ る. I 々 ま ず, す で に が ク ロ ー ン change し た normal ヒ ト origin alpha1A cDNA に PCR を using し て EA2 - vision (C4110T, R1279 が Stop コ ド ン に な る) を import し た (EA2 - alpha1A). こ の EA2 - alpha1A cDNA を マ ウ ス alpha1A posthumous son 伝 の internality プ ロ モ ー タ ー で 発 now さ せ る こ と を refers し, Cre - lox を using し て マ ウ ス embryonic stem cells (ES cells) の alpha1A posthumous son 伝 エ ク ソ ン 1 に scions into す る こ と を try み た. こ れ は, - different import lox match column (lox71 お よ び lox66) between の Cre に よ る group in え anti 応 は, originally の match column で あ る loxP の group in between - loxP え anti 応 に く ら べ て negative 応 が up こ り に く い と い う こ と に base づ で く method, chromosome specific の の position に foreign heritage 伝 son を sharper rate に scions Youdaoplaceholder0 で ると take えられる. lox66,EMCV origin IRES, EA2-alpha1A cDNA PolyA シ グ ナ ル, ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience heritage 伝 son カ セ ッ ト, を む ノ ッ ク イ ン ベ ク タ ー を as し, こ れ を マ ウ ス alpha1A エ ク ソ ン 1 に lox71 match column が scions into さ れ た ES cells (BI - 176) に Cre 発 now ベ ク タ ー と と も に import し た. そ の results, ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience の strains about 30% と い う high い で sharper rate の EA2 ノ ッ ク イ ン が ES cells have ら れ た. Youdaoplaceholder0 て て conventional method に従 た EA2ノッ ノッ た <s:1> ウスを ウスを ウスを ウスを production た た. ま た, parent strain で あ る BI - 176 cells に import し た - different は alpha1A posthumous son 伝 の ヌ ル - different で あ る と expect さ れ る の で, EA2 - different と の is を may に す る た め BI - 176 origin マ ウ ス も cropping し た. Now は こ れ ら の マ ウ ス の mating に よ り ホ モ gametes が have ら れ る こ と が.at し た Duan Jie で あ り, future そ れ ら の action learning, pathology な parsing を す す め る designated で あ る.

项目成果

Matsuda, Y.: "Mice lacking Cav2.3(alpha 1E) calcium channel exhibit hyperglycemia"Biochem. Biophys. Res. Commun.. 289(4). 791-795 (2001)

Matsuda, Y.：“缺乏 Cav2.3(alpha 1E) 钙通道的小鼠表现出高血糖”Biochem。

Toriyama, H.: "Role of Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel in ischemic neuronal injury"Neuroreport. 13(2). 261-265 (2002)

Toriyama, H.：“Cav2.3(alpha 1E) Ca2 通道在缺血性神经元损伤中的作用”Neuroreport。

Sakata, Y.: "Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ channel participates in the control of sperm function"FEBS lett.. (印刷中). (2002)

Sakata, Y.：“Cav2.3(alpha 1E) Ca2+ 通道参与精子功能的控制”FEBS lett..（出版中）。

Saegusa, H.: "Suppression of inflammatory and neuropathic pain symptoms in mice lacking N-type Ca2+ channel"EMBO J.. 20(10). 2349-2356 (2001)

Saegusa, H.：“缺乏 N 型 Ca2 通道的小鼠炎症和神经性疼痛症状的抑制”EMBO J.. 20(10)。

Tsunemi, T.: "Novel Cav2.1 splice variants isolated from Purkinje cells do not generate P-type Ca2+ current"J. Biol. Chem.. 277(9). 7214-7221 (2002)

Tsunemi, T.：“从浦肯野细胞中分离出的新型 Cav2.1 剪接变体不会产生 P 型 Ca2 电流”J.