P/Q型CaチャネルをN型Caチャネルに置換したマウスの作製

制备 P/Q 型 Ca 通道被 N 型 Ca 通道取代的小鼠

• 批准号: 13770020
• 负责人: 三枝 弘尚
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13770020/
• 关键词: P; Q型Caチャネル; N型Caチャネル; ノックインマウス

本研究においてはP/Q型Caチャネルをコードするalpha1A遺伝子内にN型Caチャネルをコードするalpha1BサブユニットのcDNAを挿入し、P/Q型チャネルが本来機能すべきところをN型チャネルに置き換えたノックインマウスを作製する。そして、これらの構造上類似したチャネルが機能的に等価であるのか、すなわち、alpha1Aの欠損をalpha1Bで補うことが可能かどうかをマウス個体のレベルで検討する。本年度は、ウサギalpha1B cDNAをalpha1A遺伝子に挿入したノックインマウスの作製を試みた。昨年度樹立したノックインES細胞を用いてキメラマウスを作製した。そして、このキメラマウスをC57BL/6系マウスと交配し、ノックインヘテロマウスを得た。さらに、このF1ヘテロマウスどうしの交配によりF2世代を得た。その結果ノックインホモマウスは、既に報告されているalpha1Aノックアウトマウスと同様の症状を示し、離乳期頃に死亡することが明らかとなった。しかし、ノックインマウスに導入されたウサギalpha1Bの発現レベルはあまり高くないことが示唆されたので、現在のところalpha1Bでalpha1Aの欠損を補償することができないとは断言できない。現在は、alpha1B cDNAを挿入する際に同時に挿入された選択マーカーであるハイグロマイシン耐性遺伝子等をFLPeリコンビナーゼとその認識配列であるFRTのシステムを用いて除去することによりウサギalpha1Bの発現量を増大させることを試みている。このいわば第二世代のノックインマウスを今後解析することにより、alpha1Aとalpha1Bの機能的な関係についてより厳密な議論ができるものと考えられる。

This study に お い て は P/Q type Ca チ ャ ネ ル を コ ー ド す る alpha1A heritage 伝 child within に n-type Ca チ ャ ネ ル を コ ー ド す る alpha1B サ ブ ユ ニ ッ ト の cDNA を scions into し, P/Q type チ ャ ネ ル が function originally す べ き と こ ろ を n-type チ ャ ネ ル に buy き in え た ノ ッ ク イ ン マ ウ ス を cropping す る. そ し て, こ れ ら の structure similar し た チ ャ ネ ル が function に etc 価 で あ る の か, す な わ ち, alpha1A の owe loss を alpha1B で fill う こ と が may か ど う か を マ ウ ス individual の レ ベ ル で す 検 please る. This year は, ウ サ ギ alpha1B cDNA を alpha1A heritage 伝 son に scions into し た ノ ッ ク イ ン マ ウ ス の cropping を try み た. Last year, <s:1> たノッ, <s:1>, を, ES cells を were established using たノッ, てキメラ, ウスを, ウスを to prepare <s:1>. そ し て, こ の キ メ ラ マ ウ ス を C57BL / 6 series マ ウ ス と し, mating ノ ッ ク イ ン ヘ テ ロ マ ウ ス を た. Youdaoplaceholder0, た さらに F1ヘテロ ウス ウス <s:1> う う さらに さらに mate によ F2 generation を た. そ の results ノ ッ ク イ ン ホ モ マ ウ ス は, both に report さ れ て い る alpha1A ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス と with others の symptoms を し, worthy of the に death from breast feeding す る こ と が Ming ら か と な っ た. し か し, ノ ッ ク イ ン マ ウ ス に import さ れ た ウ サ ギ alpha1B の 発 now レ ベ ル は あ ま り high く な い こ と が in stopping さ れ た の で, now の と こ ろ alpha1B で alpha1A の owe loss compensation す を る こ と が で き な い と は assertion で き な い. Now youdaoplaceholder6, alpha1B CDNA を scions into す る interstate に simultaneously に scions into さ れ た sentaku マ ー カ ー で あ る ハ イ グ ロ マ イ シ ン patience heritage 伝 child such as を FLPe リ コ ン ビ ナ ー ゼ と そ の meet with column で あ る FRT の シ ス テ ム を with い て remove す る こ と に よ り ウ サ ギ alpha1B の 発 を raised large amount of now さ せ る こ と を try み て い る. こ の い わ ば second generation の ノ ッ ク イ ン マ ウ ス を future analytic す る こ と に よ り, alpha1A と alpha1B の functionary な masato is に つ い て よ り 厳 secret talk な が で き る も の と exam え ら れ る.

项目成果

Tsunemi, T.: "Novel Cav2.1 splice variants isolated from Purkinje cells do not generate P-type Ca2+ current."J. Biol. Chem.. 277. 7214-7221 (2002)

Tsunemi, T.：“从浦肯野细胞中分离出的新型 Cav2.1 剪接变体不会产生 P 型 Ca2 电流。”J.

Han, W.: "Altered cocaine effects in mice lacking Ca_v2.3 (α_<1E>) calcium channel"Biochem. Biophys. Res. Commun. 299. 299-304 (2002)

Han, W.：“缺乏 Ca_v2.3 (α_<1E>) 钙通道的小鼠中可卡因的作用”Biochem. Res. 299. 299-304 (2002)

Saegusa, H: "Suppression of inflammatory and neuropathic pain symptoms in mice lacking N-type Ca2+ channel.Suppression of inflammatory and neuropathic pain symptoms in mice lacking N-type Ca2+ channel."EMBO J.. 20. 2349-2356 (2001)

Saegusa, H：“缺乏 N 型 Ca2 通道的小鼠中炎症和神经性疼痛症状的抑制。缺乏 N 型 Ca2 通道的小鼠中炎症和神经性疼痛症状的抑制。”EMBO J.. 20. 2349-2356 (2001)

Saegusa, H.: "Effects of ablation of N-and R-type Ca^<2+> channels on pain transmission"Neurosci. Res.. 43. 1-7 (2002)

Saegusa, H.：“消融 N 型和 R 型 Ca^2 通道对疼痛传递的影响”Neurosci。

Takei, T.: "Anesthetic sensitivities to propofol and halothane in mice lacking the R-type (Ca_v2.3) Ca^<2+> channel"Anesth. Analg.. (印刷中).

Takei, T.：“缺乏 R 型 (Ca_v2.3) Ca^2+ 通道的小鼠对异丙酚和氟烷的麻醉敏感性”Anesth..（出版中）。