ヒト癌細胞におけるTGF-β低反応性と,Smad4の質的・量的変化との関連

人癌细胞中TGF-β低反应性与Smad4质、量变化的关系

• 批准号: 13214010
• 负责人: 萩原 弘一
• 金额: $ 2.88万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214010/
• 关键词: TGF-β; HaCaT細胞; Smad4; 増殖抑制; 細胞骨格; microarray; ルシフェラーゼ; Smad4プロモーター

上皮細胞由来のほぼ全ての初代培養細胞に対しTGF-βは増殖抑制作用を示す.一方癌細胞においてはTGF-βは軽度の増殖低下を引き起こすのみであるTGF-βに対する不応性獲得機構の解明はヒトの発癌過程を解明する上で不可欠のものである.1.Smad4プロモーターの各種細胞株における活性の検討Smad4プロモータの下流にルシフェラーゼ遺伝子を挿入したプラスミドpSmad4-lucを作成し,このプラスミドより,プロモーターの連続欠失クローンを作成,Smad4発現低下癌細胞,Smad4発現の比較的保たれている不死化細胞株双方に導入し,そのプロモータ活性の比較を行った.HaCaT細胞と比較して,HaCaT II-4細胞,癌細胞はSmad4プロモーターの活性が有意に低かった.2.Smad4の発現の低下と同時期に消失,または発現増加をする遺伝子の検索Microarrayを使用し,Smad4の発現の低下と同時期に消失,または発現増加をする遺伝子の検索を行なった.不死化細胞株HaCaT(非腫瘍形成性),その腫瘍形成性derivative HaCaT II-4,および各種癌細胞株)の比較を行った.予備的なMicroarray解析の結果では,これらの細胞株からTGF-β反応性と明確に関連した遺伝子発現の変化を示す遺伝子は見つかっていない.3.Smad4発現と細胞環境との関連我々は,血清のロットを変えることにより、Smad4の発現が変化することを見出した.これは,癌細胞がその環境に応じてそのTGF-β反応性を変化させること,すなわち,TGF-βの豊富に存在する部位にも遠隔転移が可能である可能性を示している.4.Smad4発現とその細胞内動態との関連HaCaT II-4細胞では,HaCaT細胞と比較し,核内移行は変化なかったが、細胞質にSmad4の残存が認められた.この残存Smad4と細胞骨格の関連に関して,各種細胞骨格抗体を使用し,そのlocalizationが一致するかconfocal microscopyにて検討を行っている.

The inhibitory effect of the first-generation cultured cells に on the proliferation of TGF-β in the epithelial cells を shows す. A cancer cell に お い て は TGF - beta は 軽 degrees の raised low yield を lead き up こ す の み で あ る TGF - beta に す seaborne る 応 sex from institutions not の interpret は ヒ ト の 発 carcinoma process を interpret す る で not owe on の も の で あ る. 1. Smad4 プ ロ モ ー タ ー の all kinds of cell lines に お け る active の beg Smad4 検 プ ロ モ ー タ の obscene に ル シ フ ェ ラ ー ゼ posthumous son 伝 を scions into し た プ ラ ス ミ ド pSmad4 - luc を し consummate, こ の プ ラ ス ミ ド よ り, プ ロ モ ー タ ー の even lost 続 owe ク ロ ー ン を done Smad4 発 now low cancer cells, Smad4 発 の is confirmed now た れ て い る undead cell lines both に import し, そ の プ ロ モ ー の is を タ activity Line った.HaCaT cells と compare て,HaCaT II - 4 cells, cancer cells は Smad4 プ ロ モ ー タ ー の active が intentionally に low か っ た. 2. The Smad4 の 発 now low の と に disappear with time, ま た は 発 now rights を す る posthumous son 伝 の 検 cable Microarray を use し, Smad4 の 発 now low の と に disappear with time, ま た は 発 now rights を す る heritage 伝 son の 検 Ask を lines なった. The undying cell line HaCaT(non-tumor-forming),そ <s:1> tumor-forming derivative HaCaT II-4,および various cancer cell lines) <s:1> comparison を line った. To prepare な analytical の Microarray results で は, こ れ ら の cell lines か ら TGF - beta 応 sex と clear に masato even し た heritage 伝 son 発 の now - the を shown す heritage 伝 は son see つ か っ て い な い. 3. Smad4 発 now と cell environment と の masato even I 々 は, serum の ロ ッ ト を - え る こ と に よ り and Smad4 の 発 now が variations す る こ と を shows し た. こ れ は, cancer cells が そ の environment に 応 じ て そ の TGF - beta を 応 sex - the さ せ る こ と, す な わ ち, TGF - beta の aboundant に exist す る parts に も far planning may move が で あ を る possibility in し て い る. 4. Smad4 発 now と そ の intracellular dynamic と の masato HaCaT II - 4 cells で は, と compare し HaCaT cells, nuclear internal migration は variations change な か っ た が, cytoplasmic に Smad4 の residual が recognize め ら れ た. こ の residual Smad4 と cells bone の masato even に masato し て, various kinds of bone cells antibody を use し, そ の localization が consistent す る か confocal microscopyにて検 ask for を line って る る.

项目成果

Yanaihara, N., Kohno.T., Takakura.S., Takei, K..Otsuka, A., Sunaga.N., Takahashi, M., Yamazaki, M., Tashiro, H., Fukuzumi, Y., Fujimori, Y., Hagiwara, K., Tanaka, T., Yokota.J.: "Physical and Transcriptional Map of a 311-kb Segment of Chromosome 18q21,a C

Yanaihara, N.、Kohno.T.、Takakura.S.、Takei, K..Otsuka, A.、Sunaga.N.、Takahashi, M.、Yamazaki, M.、Tashiro, H.、Fukuzumi, Y.、

Kawate, S., Ohwada, S., Hamada, K., Koyama, T., Takenoshita, S., Morishita, Y., Hagiwara, K.: "Mutational analysis of the Smad6 and Smad7 genes in hepatocellular carcinoma"International Journal of Molecular Medicine. 8. 49-52 (2001)

Kawate, S.、Ohwada, S.、Hamada, K.、Koyama, T.、Takenoshita, S.、Morishita, Y.、Hagiwara, K.：“肝细胞癌中 Smad6 和 Smad7 基因的突变分析”国际杂志

Osawa, H., Shitara, Y., Shoji, Mogi, A., Kuwano, H., Hagiwara, K., Takenoshita, S.: "Mutation analysis of transforming growth factor beta type II receptor, smad2, smad3, and smad4 in esophageal squamous cell carcinoma"International Journal of Oncology. 17

Osawa, H.、Shitara, Y.、Shoji, Mogi, A.、Kuwano, H.、Hagiwara, K.、Takenoshita, S.：“转化生长因子 β II 型受体、smad2、smad3 和 smad4 的突变分析

Nagashima, M., Shiseki, M., Miura, K., Hagiwara, K., Linke, S.P., Pedeux, R., Wang, X.W., Yokota, J., Riabowol, k., Harris, C.C.: "DNA damage-inducible gene p33ING2 negatively regulates cell proliferation through acetylation of p53"Proceedings of National

Nagashima, M.、Shiseki, M.、Miura, K.、Hagiwara, K.、Linke, S.P.、Pedeux, R.、Wang, X.W.、Yokota, J.、Riabowol, k.、Harris, C.C.：“DNA 损伤

Pradono P, Tazawa R, Maemondo M, Tanaka M, Usui K, Saijo Y, Hagiwara K, Nukiwa T.: "Gene transfer of thromboxane A(2) synthase and prostaglandin I(2) synthase antithetically altered tumor angiogenesis and tumor growth"Cancer Research. 62. 63-66 (2002)

Pradono P、Tazawa R、Maemondo M、Tanaka M、Usui K、Saijo Y、Hagiwara K、Nukiwa T.：“血栓素 A(2) 合酶和前列腺素 I(2) 合酶的基因转移相反地改变了肿瘤血管生成和肿瘤生长”