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ヒト正常細胞を用いた癌遺伝子の研究

利用正常人体细胞研究癌症基因

基本信息

批准号：
13214112
负责人：
赤城剛
金额：
$ 3.26万
依托单位：
Osaka Bioscience Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13214112/
关键词：
遺伝子細胞・組織シグナル伝達癌老化 ras SV40 T抗原 EIA

项目摘要

1.ヒト正常繊維芽細胞への高効率安定遺伝子導入法の確立。ヒト正常細胞を用いた癌遺伝子の研究が進まなかった背景には、正常細胞の特質に由来する技術的な困難さがある。すなわち、正常細胞は一般の細胞株と比較してconventionalなトランスフェクションによる遺伝子導入の効率が極めて悪いこと。分裂寿命を有するために、限られた回数しか分裂できないこと。細胞密度が低い状態だと増えにくいこと。などの理由により、安定な外来遺伝子導入細胞を作製し生化学的な解析を行うのに十分な数まで殖やすことが非常に困難であった。特に、ヒトの正常細胞をトランスフォームさせようとすると、複数の遺伝子を安定に導入する必要があり、これを従来のトランスフェクションで行うのは事実上、不可能であると思われる。この目的には、レトロウイルスベクターを用いるのが最も適しているが、癌遺伝子を扱うので、バイオハザードの観点からも、ヒトに感染するamphotropic retrovirus(ARV)は極力使わない方が望ましい。そこで、まず最初に、齧歯類にのみ感染するecotropic retrovirus(ERV)のレセプター遺伝子をヒト正常細胞に導入し(この際には、ARV vectorを使わざるを得ない。)、一旦、その様な細胞を得てからは、ERV vectorを用いて、外来遺伝子の導入を行うというストラテジーを取った。TIG-1、TIG-3、MRC-5、IMR-90、BJなどのこれまで細胞老化の研究に良く用いられてきたヒト正常2倍体繊維芽細胞(HDF)に、ERVのレセプター遺伝子を導入したところ、これらのHDFは、マウスERV vectorに対して大変感受性が高く、我々が開発したCX4レトロウイルスベクターと北村俊雄博士(東大医科研)らが開発したERV packaging細胞Plat-Eを組み合わせて使うことによって非常に高い効率(ほぼ100%)で外来遺伝子を安定に導入することが可能になった。2.正常繊維芽細胞への癌遺伝子の導入。上記のシステムを用いて不死化を起こす遺伝子(テロメラーゼの触媒サブユニットcDNAやc-myc)、癌抑制遺伝子であるRbやp53を不活化する遺伝子(SV40 T抗原、アデノウイルスのE1A、あるいは変異型p53)、優性な癌遺伝子(活性化型H-ras)の少なくとも3つのカテゴリーの遺伝子を、単独またはいくつかの組み合わせで導入したHDFを得ることに成功した。

1. The normal maintenance of germ cells and the establishment of a high rate of diazepam and diazepam. In the study of normal cells, the background of cancer cells and the causes of technological difficulties in normal cells were studied. In general, the percentage of cell lines was higher than that of normal cells and normal cells. The rate of infection was higher than that of conventional cells. The life span of division is limited to the number of cycles, the number of cycles, the number of divisions, and the length of life. The cell density is low. The reason for this is that it is very difficult to make an analysis of biochemistry, such as the analysis of biochemistry, the analysis of biochemistry, the number of ten, the number of colonies, the number of colonies, and so on. In this case, you can tell me that it is impossible to think about what is necessary, that is, if you want to know what is necessary, you can't think about it because of your needs. The purpose of this study is to make sure that the patients are infected with amphotropic retrovirus (ARV), and that the patients with cancer, cancer and cancer. This is the first time that people are infected with ecotropic retrovirus (ERV). They do not have a problem with normal cell growth. ARV vector makes it easier for users to receive information.) Once, you can get the data from the cell, use the ERV vector, and get the information from the outside world. TIG-1, TIG-3, MRC-5, IMR-90, BJ Cell Aging study of normal diploid germ cells (HDF), ERV, HDF, ERV vector, cell aging, cell We are interested in Dr. Toshio Kitamura (senior medical research), who is responsible for the development of CX4 health care system. Dr. Toshio Kitamura (a senior doctor and scientific research) has conducted a comprehensive study of the ERV packaging cell Plat-E system so that the rate of infection is very high, and it is possible for foreign workers to be stable and stable. two。 Normal maintenance germ cells and cancer cells were introduced. The cancer suppressor gene (Rb), the inactivated (SV40 T antigen), the inactivated (E1A, the active H-ras), the active (active H-ras), the cancer suppressor (active H-ras), the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer inhibitor, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the cancer suppressor, the inactivated p53, the cancer suppressor, the inactivated p53, the active cancer, the active cancer, the cancer, This is the only way to get a successful response when you join the HDF.