HTLV-1エンベロープタンパクのT細胞の増殖に対する影響

HTLV-1包膜蛋白对T细胞增殖的影响

• 批准号: 06770235
• 负责人: 赤城 剛
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770235/
• 关键词: HTLV-I; Tリンパ球; 不死化; Tax遺伝子; env遺伝子; IL-2

HTLV-1によるTリンパ球のトランスフォーメーションには、転写活性化因子であるTaxが重要であると考えられているが、我々および他のグループの結果より、Taxの導入は正常Tリンパ球を不死化する事はできるが、多くのHTLV-1感染細胞が示すIL-2非依存的増殖能の獲得までには至らしめない事が示された。このことより、IL-2非依存的増殖能の獲得には、Tax以外のウイルス遺伝子産物が関与している可能性が示唆された。我々は、envタンパクをその有力な候補と考え、HTLV-1env遺伝子産物のTリンパ球の増殖に対する影響の検討を試みた。そのために、まず、HTLV-1env遺伝子発現ベクターを構築した。最終的には、レトロウイルスベクターの系を考えたが、その前段階としてEBウイルス由来のプラスミドベクターpEHT22を用い、マウスH-2プロモーターにHTLV-1env遺伝子産物をつないだpEHT22/H2-env.pXを作成した。このプラスミドベクターをエレクトロポーレーションによって、IL-2依存性HTLV-1感染T細胞KN6-HT、および我々が既に得ているTaxを導入してIL-2依存的に不死化したT細胞PBL/DGL-Tax1に導入し、引き続きハイグロマイシンによる選択を行うことによりenv遺伝子のステーブルトランスフォーマントを得ることを試みた。KN6-HTからはステーブルトランスフォーマントが得られたが、PBL/DGL-Tax1からは得られなかった。KN6-HTのpEHT22/H2-env.pXのステーブルトランスフォーマントをIL-2を除いた培地で培養したところ、大部分の細胞は1ヵ月程度で死滅したが、ごく一部、増殖を続ける細胞が出現してきた。しかしながら、この細胞でのenvタンパクの発現をウエスタンブロットにより解析したところ、親株とほとんど変わらないレベルしか発現していなかった。さらに、親株を同様にIL-2を除いた培地で培養した場合でも、同様の頻度でIL-2非依存性の細胞が出現してきたことにより、IL-2非依存性の細胞の出現は、pEHT22/H2-env.pXの導入によるものではないことがわかり、IL-2非依存的増殖能の獲得におけるenvタンパクの関与の可能性については、否定的な結果が得られた。一方、PBL/DGL-Tax1は、抗CD3で刺激すると、IL-2非依存的増殖反応を示す事がわかり、Tax1のみを導入したT細胞も、IL-2非依存的増殖のパスウェーを潜在的に持っていることが示唆された。

HTLV-1-infected cells show IL-2-independent growth ability, which is the result of the introduction of Tax into normal T cells. The possibility of obtaining IL-2-independent reproductive activity and producing IL-2-dependent products other than Tax is discussed. We are trying to investigate the influence of HTLV-1env gene products on the reproduction of HTLV-1env gene products. HTLV-1env gene development and construction The final product of HTLV-1 is pEHT22/H2-env.pX. IL-2-dependent HTLV-1 infection of T cells KN6-HT, IL-2-dependent T cells PBL/DGL-Tax1, IL-2-dependent T cells KN6-HT KN6-HT pEHT22/H2-env.pX cells were cultured in vitro except IL-2, most of which died in one month. The cell's env is revealed by the analysis of the cell's env. IL-2-independent cells appeared at the same frequency as the parent plants in culture, IL-2-independent cells appeared at the same frequency, IL-2-independent cells appeared at the same time, pEHT22/H2-env.pX was introduced, IL-2-independent proliferation ability was acquired, and negative results were obtained. On the one hand, PBL/DGL-Tax1 is resistant to CD3 stimulation, IL-2-independent proliferation response is indicated, Tax1 is introduced into T cells, IL-2-independent proliferation response is indicated.