HTLV-I感染T細胞で高発現しているp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の解析

HTLV-I 感染的 T 细胞中高表达的 p21^<Waf1/Cip1/SdiI> 分析

• 批准号: 08670355
• 负责人: 赤城 剛
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670355/
• 关键词: HTLV-I; Tax1; Cell cvcle; Cdk; Cyclin; p21^<Waf1; Cip1; SdiI>; p53; 細胞不死化

HTLV-I感染T細胞株はcdk inhibitorのp21^<Waf1/Cip1/SdiI>を高レベルで発現していながら細胞増殖を維持することができる。この増殖メカニズムの解明を最終目的として、以下のような検討を行った。(1)p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現誘導に伴って細胞周期停止が引き起こされるHL-60の分化誘導系とHTLV-I感染T細胞との比較を行った。実際には、分化誘導後のHL-60(TPA10ng/ml処理24hr後)とMT-2との間で、p21^<Waf1/Cip1/SdiI>,Cdc2,Cdk2,Cdk4,Cdk5,Cdk6,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin E各タンパクの発現量を比較した。両者の間でp21Waf1/Cip1/SdiI,Cdc2,Cdk2,Cdk4,Cdk5,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin Eの量には大差なかったが、Cdk6のみは、HL-60では分化に伴い有意に低下し、MT-2よりかなり低いレベルになっていた。このCdk6の違いが何らかの意味を持つ事が示唆されたが、タンパク量の変化のみでなくkinase活性の変化を見るなど、さらなる検討が必要であると思われる。(2)HTLV-Iのトランスアクティベータ-であるTax1がp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の細胞周期進行停止活性をダイレクトに打ち消している可能性を検討する目的で、p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現ベクターとTax1の発現ベクターをNIH3T3細胞、およびMOLT-4細胞にco-transfectionしてコロニー形成能の変化を見た。p21^<Waf1/Cip1/SdiI>の導入によりコロニー形成は約1/10に低下したが、これはTax1を共発現させても変化せず、またコロニーを形成した細胞中でのp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の発現レベルもTax1の有無で違いがなかった。このことより、Tax1がp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の細胞周期進行停止活性をダイレクトに打ち消している可能性は低いものと考えられた。(3)HTLV-I感染T細胞株およびTax1のみで不死化したT細胞で観察されるp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の高レベル発現へのp53の関与の可能性を検討した。HTLV-I感染T細胞株およびTax1不死化T細胞は野生型p53を正常T細胞と比較して高いレベルで発現していたが、そのトランスアクティベーション機能には著しい低下が認められ、p53の発現上昇がそのままp21^<Waf1/Cip1/SdiI>の高レベル発現の原因になっているとは考えにくいと思われた。

HTLV-I infected T cell lines are highly resistant to cdk inhibitor p21^<Waf1/Cip1/Sdi I>, and are highly resistant to cell proliferation. The final goal of this project is to discuss the following issues. (1) Comparison of induction of p21^<Waf1/Cip1/Sdi I> with cell cycle arrest, initiation of HL-60 differentiation induction line and HTLV-I infection of T cells. In the meantime, HL-60(treated with TPA10ng/ml for 24hr) and MT-2 were detected at different time points, p21^<Waf1/Cip1/Sdi I>,Cdc2, Cdk 2,Cdk4,Cdk5,Cdk6,Cyclin A,Cyclin B and Cyclin E were detected at different time points. The difference in the amount of Cyclin A, Cyclin B,Cyclin E,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin E,Cyclin A,Cyclin B,Cyclin A, Cyclin B This Cdk6 violation is not only a matter of time, but also a matter of time. (2) To investigate the possibility of HTLV-I cell cycle arrest activity, p21 ^<Waf1/Cip1/SdiI> co-transfection formation in NIH 3T3 cells, p21^<Waf1/Cip1/SdiI> cells. p21^<Waf1/Cip1/SdiI> is introduced into the cell, and the expression of p21^<Waf1/Cip1/SdiI> is about 1/10 of the time. The cell cycle arrest activity of Tax1, p21^<Waf1/Cip1/SdiI> is low. (3) To investigate the relationship between HTLV-I infection and p53 expression in T cell lines infected with p21^<Waf1/Cip1/Sdi I>. HTLV-I infected T cell lines and Tax1 immortal T cells reverse wild-type p53 to normal T cells, and the expression of p53 is higher than that of normal T cells. The function of p53 is lower than that of normal T cells, and the expression of p53 is higher than that of normal T cells.

项目成果

赤城 剛: "Expression of cell-cycle regulatory genes in HTLV-I infected T-cells : Possible involvement of Tax1 in the altered expression of cyclin D2,p18Ink4,and p21Waf1/Cip1/SdiI." Oncogene. 12. 1645-1652 (1996)

Tsuyoshi Akagi：“HTLV-I 感染的 T 细胞中细胞周期调节基因的表达：Tax1 可能参与细胞周期蛋白 D2、p18Ink4 和 p21Waf1/Cip1/SdiI 表达的改变。”12. 1645-1652（癌基因） 1996）

赤城 剛: "Tyrosine Kinase Inhibitor Herbimycin A Reduces the Stability of Cyclin-dependent Kinase Cdk6 protein in T-cells." Oncogene. 13. 399-405 (1996)

Tsuyoshi Akagi：“酪氨酸激酶抑制剂除草霉素 A 降低 T 细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶 Cdk6 蛋白的稳定性。”13. 399-405 (1996)

赤城 剛: "Characterization of peripheral blood T-lymphocytes transduced with HTLV-I Tax mutants with different trans-activating phenotypes" Oncogene. 14(印刷中). (1997)

Tsuyoshi Akagi：“用具有不同反式激活表型的 HTLV-I Tax 突变体转导的外周血 T 淋巴细胞的特征”Oncogene 14（出版中）。