1p36のBACコンティグを用いた神経芽腫、肺癌と悪性黒色腫の癌抑制遺伝子の探索

使用 1p36 BAC 重叠群搜索神经母细胞瘤、肺癌和恶性黑色素瘤中的肿瘤抑制基因

• 批准号: 13218028
• 负责人: 小林 美由紀
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218028/
• 关键词: 遺伝子; ゲノム; バイオテクノロジー; マイクロアレイ; 神経芽腫; KIF1B; DFF45

神経芽腫、肺癌と悪性黒色腫において1番染色体短腕(1p)のp35-36領域には、発生・進展に重要な役割を果たす遺伝子が座位すると推測される。この領域の大部分をカバーするBACコンティグを作成し、これを用いて神経芽腫25細胞株中1株(NB-1)に約480kbのホモ欠失領域を同定し、この領域より7個の既知の遺伝子(E4,KIF1B, SCYA5, PGD, Cortistain, DFF45,PEX14)、3つのEST、2つのマイクロサテライトマーカーを同定した。これらの遺伝子のうちキネシンfamilyであるKIF1B-β遺伝子のcDNAとexon-intron配列を決定し、少なくとも47exonを有することをみいだした。この遺伝子は一部の神経芽腫の新鮮腫瘍で発現の低下がみられた。またpolymerase chain reaction (PCR)-single strand conformation polymorphism(SSCP)による変異解析ではframe shift mutationはみられなかったが、3カ所でmissense mutationが、2カ所で遺伝子多型がみられた。またヘテロ接合体欠失(LOH)は16例中6例(38%)にみられた。これらのことより、KIF1B-β遺伝子は神経芽腫の候補癌抑制遺伝子の可能性は低いと考えられた。さらに家系のマッピングより、Charcot-Marie-Tooth disease 2A型(CMT2A)の原因遺伝子が1p36.2にあることが推測されたので、CMT2Aの患者検体を用いてPCR-SSCP法で変異を検討したところ、motorドメインにmissense mutationを検出した。この変異により、この遺伝子のin vitroでのATP活性の低下が認められた。またこの遺伝子のヘテロ欠失マウスは生後CMT2A同様の神経症状がみられ、この遺伝子がCMT2Aの原因遺伝子であることをみいだした。さらにKIF1B-α遺伝子を単離し、神経芽腫で検討している。DFF45はcaspase3がアポトーシスを誘導するのに必要な蛋白である。NB-l株でホモ欠失がみられたので、神経芽腫でreverse transcriptase(RT)-PCRによる発現の、PCR-SSCP法による変異の検討を行ったが、発現の減弱や変異はみられず、alternative splicingによると思われる多数のisoformがみられた。これらのisformは腫瘍のみにみられるものもあった。これらのことよりDFF45遺伝子は神経芽腫の癌抑制遺伝子の可能性は低いと思われた。肺癌と悪性黒色腫についても細胞株の検討を始めたところである。

In neuroblastoma, lung cancer, and melanoma, the region of p35-36 on chromosome 1 is predicted to be important for development and progression. Most of these domains were created and used. One of the 25 cell lines (NB-1) had a 480kb domain that was identical. Seven known genes (E4, KIF1B, SCYA5, PGD, Cortistain, DFF45, PEX14), three EST, and two EST were identical. KIF-1B-β gene cDNA and exon-intron alignment is determined by the number of exon. This is the first time that a brain tumor has occurred. Polymerase chain reaction (PCR)-single strand conformation polymorphism(SSCP) is the most common form of polymorphism. 6 out of 16 cases (38%) were found to be deficient in heterozygotes. KIF1B-β gene has low probability of tumor suppressor candidate gene in brain tissue. In addition, PCR-SSCP method was used to detect the difference between the two types of family, Charcot-Marie-Tooth disease type 2A (CMT2A) and its causal gene 1p36.2. The ATP activity in vitro was lower than that in vitro. The symptoms of CMT 2A are similar to those of CMT 2A. KIF-1B-α gene was isolated from the brain and was examined in vitro. DFF45 is an essential protein for caspase3. NB-l strain, reverse transcriptase(RT)-PCR detection, PCR-SSCP method, reverse transcriptase detection, reverse transcriptase detection, alternative splicing detection, reverse transcriptase detection, reverse transcriptase detection, reverse transcriptaseこれらのisformは肿疡のみにみられるものもあった。DFF45 is a gene that has a low probability of inhibiting tumor growth. Lung cancer is a disease caused by black tumors.

项目成果

Ohnishi H.: "An infant with t(4 ; 11)(q21 ; q23) acute lymphoblastic leukemia successfully treated using immunomagnetically purged autologous bone marrow transplantation"Med Pediatr Oncol. 36. 388-389 (2001)

Ohnishi H.：“使用免疫磁性净化自体骨髓移植成功治疗了一名患有 t(4 ; 11)(q21 ; q23) 急性淋巴细胞白血病的婴儿”Med Pediatr Oncol。

Zhao C.: "Charcot-marie tooth disease type 2a caused by mutation in a microtubule motor kifibbeta"Cell. 105. 587-597 (2001)

赵 C.：“由微管运动 kifibbeta 突变引起的 2a 型夏科-玛丽牙病”细胞。

Ono R.: "SEPTIN6, a Human Homologue to Mouse Septin6, Is Fused to MLL in Infant Acute Myeloid Leukemia with Complex Chromosomal Abnormalities Involving 11q23 and Xq24"Cancer Res. 62. 333-337 (2002)

Ono R.：“SEPTIN6 是小鼠 Septin6 的人类同源物，在患有涉及 11q23 和 Xq24 的复杂染色体异常的婴儿急性髓性白血病中与 MLL 融合”癌症研究。

Yang HW: "DNA fragmentation factor 45 (DFF45) gene at 1p36.2 is homozygously deleted and encodes variant transcripts in neuroblastoma cell line."Neoplasia. 3. 165-169 (2001)

Yang HW：“1p36.2 处的 DNA 片段因子 45 (DFF45) 基因被纯合删除，并在神经母细胞瘤细胞系中编码变异转录本。”肿瘤。

Chen YZ: "Homozygous deletion in a neuroblastoma cell line defined by a high-density STS map spanning human chromosome band 1p36."Genes Chromosomes Cancer. 31. 326-332 (2001)

Chen YZ：“神经母细胞瘤细胞系中的纯合缺失由跨越人类染色体带 1p36 的高密度 STS 图谱定义。”基因染色体癌症。