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肝癌に対するSeM/METシステムによる新しい遺伝子治療の開発

利用 SeM/MET 系统开发肝癌新基因疗法

基本信息

批准号：
13218039
负责人：
三木健司
金额：
$ 4.16万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は、Pseudomomas putidaより、cloningした、methionine-γ-lyase (MET)を、組換えadenovirus vectorに組み込み(Ad-MET)、メチオニンの誘導体であるセレノメチオニン(SeM)の存在下に非常に強い抗癌作用を発揮することを発見した。本研究では、MET/SeMシステムの殺細胞効果のメカニズムの解明と肝癌細胞株を移植したnude mouseを用いてin vivoでの治療効果を検討した。SeMは、MET遺伝子により分解されて、methylselenolを産生する。Methylselenolは、GSHの組織内酸素による酸化作用を触媒すると考えられる。Ad-MET感染細胞はSeM存在下にsuperoxideを産生し、組織内GSHの著明な低下することが確認された。この反応で産生された活性酸素はミトコンドリアを傷害し、menbrane potentialが低下し、ミトコンドリア内のcytochrome cの細胞質内への放出が始まる。これがトリガーとなり、caspase 9、caspase 3を活性化しapoptosisを起こすことが判明した。通常、SeMのIC50は、100〜1000μMであるが、AdMET感染細胞では0.3〜5μMまで低下した。また、AdMET感染細胞と非感染細胞の共培養の実験より、わずか3%のAdMET感染細胞により80%以上の細胞が死滅した。肝癌細胞株N1S1腹膜播種モデルにおいて、コントロールウイルス投与群あるいは、SeM非投与群がすべて3週間以内に死亡したのに比べて、Ad-MET/SeM腹腔内投与群では60%のマウスが8週間以上生存した。

In the presence of Pseudomomas putida, cloning, methionine-γ-lyase (MET), adenovirus vector (Ad-MET), and inducer (SeM), a very strong anticancer effect is developed. This study investigated the therapeutic effects of MET/SeM system on hepatocellular carcinoma cell lines transplanted into nude mice. SeM, MET gene decomposition, methylselenol production Methylselenol is a catalyst for the acidification of GSH. Ad-MET infected cells produced superoxide in the presence of SeM and GSH decreased in tissues. The production of this enzyme results in the release of cytochrome from the cytoplasm of the cells, and the decrease of membrane potential. Caspase 9 and caspase 3 are activated. Usually, SeM IC50 is lower than 100 ~ 1000μM, AdMET infected cells are lower than 0.3 ~ 5μM. Co-culture of AdMET-infected cells and non-infected cells resulted in the death of more than 80% of AdMET-infected cells. Hepatocarcinoma cell line N1S1 died within 3 weeks after intraperitoneal inoculation, and 60% of Ad-MET/SeM cells survived within 8 weeks after intraperitoneal inoculation.