MAPKK核外移行阻害天然物をシードとする新規抗癌剤の探索

使用抑制 MAPKK 核输出的天然产物作为种子寻找新的抗癌药物

• 批准号: 13218076
• 负责人: 村上 啓寿
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218076/
• 关键词: 核外移行シグナル; 核外移行阻害活性; MAPKK; valtrate; 1'-acetoxylchavicol acetate; 抗癌剤; CRM1

MAPKK核外移行シグナル(NES)と蛍光蛋白(GFP)との融合蛋白質を発現させた分裂酵母を用いたMAPKK核外移行阻害活性成分探索のためのアッセイ系を用いて、昨年度、中国産生薬カノコソウ見出した活性成分valtrateの絶対立体構造を決定した。また、本年度新たに入手した東南アジア薬用植物の抽出エキスのスクリーニングを行い、タイ産生薬Kaaよりvaltrateよりさらに低濃度でMAPKKの核外移行を阻害する成分として、1'-acetoxylchavicol acetateを明らかにし、その絶対立体構造を決定した。さらに、新たに見出した上記の2種の天然物のMAPKK高度活性化腫瘍細胞とMAPKK非活性化腫瘍細胞の増殖に与える影響を検討した。その結果、両化合物とも、期待通りMAPKK高度活性化細胞に選択的な増殖抑制効果が認められた。また、申請者が先に見出したMAPKK核外移行阻害天然物callystatin Aと今回新たに見出した活性天然物のMAPKK核外移行阻害の様式を比較解析することを目的として、callystatin A由来のビオチン標識化プローブの創製を検討した。Callystatin Aの構造活性相関研究により明らかとなった活性発現部位を有する簡略化された構造の合成アナログに、スペーサーを介しビオチンを結合することにより、CRM1の529番目のシステイン残基に結合するプローブ分子の創製に成功した。一方、新たな作用機序のMAPKK核外移行阻害天然物探索を目的として、HeLa細胞内のMAPKKの局在を間接蛍光抗体法を用いて観察する方法による新らたなアッセイ系を検討し、その構築が完了した。

MAPKK exonuclear migration inhibitor (NES) and GFP fusion protein were discovered and used in mitotic yeast to explore the active components of MAPKK exonuclear migration inhibitor. The three-dimensional structure of valtrate was determined in China. This year, new research has been conducted on the extraction of plant extracts from Southeast Asian plants, the production of kaa valtrate, the inhibition of extra-nuclear migration of MAPKK at low concentrations, and the determination of the three-dimensional structure of MAPKK. The effects of MAPKK on proliferation of MAPKK hyperactive tumor cells and MAPKK inactive tumor cells were investigated. The results showed that MAPKK highly activated cells were selected to inhibit proliferation and growth. A comparative analysis of the expression of MAPKK extra-nuclear migration barrier for active natural substances has been reported by the applicant. The purpose of this study is to explore the origin of calstatin A and its identification. The structural activity of Callystatin A was studied by simplifying the active site, combining the structural structure with the amino acid residue of CRM1 at 529 position, and successfully creating the molecular structure. A new method for detecting MAPKK in HeLa cells by indirect fluorescent antibody was developed.

项目成果

N.Murakami et al.: "Synthesis of stable analogs in blood and conformational analysis of arenastatin A, a potent cytotoxic spongean depsipeptide"Tetrahedron. 57(19). 4323-4336 (2001)

N.Murakami 等人：“血液中稳定类似物的合成和阿那他汀 A（一种有效的细胞毒性海绵缩酚肽）的构象分析”四面体。

N.Murakami et al.: "Participation of the β-hydroxyketone part for potent cytotoxicity of callystatin A, a spongean polyketide"Bioorg.Med.Chem. 9(1). 57-67 (2001)

N.Murakami 等：“β-羟基酮部分参与海绵聚酮化合物的有效细胞毒性”Bioorg.Med.Chem. 57-67 (2001)。

N.Murakami et al.: "New readily accessible peroxides with high anti-malarial potency"Bioorg. &Med. Chem. Lett.. 12(1). 69-72 (2002)

N.Murakami 等人：“具有高抗疟功效的易于获得的新型过氧化物”Bioorg。

N.Murakami et al.: "New anti-malarial flavonol glycoside from Hydrangeae Dulcis Folium"Bioorg.& Med.Chem.Lett.. 11(19). 2445-2447 (2001)

N.Murakami 等人：“来自绣球花的新型抗疟疾黄酮醇糖苷”Bioorg。

N.Murakami et al.: "Facile construction of 6-carbomethoxymethyl-3-methoxy-1,2-dioxane, a core structure of spongean anti-malarial peroxides"Tetrahedron Lett.. 42(41). 7281-7285 (2001)

N.Murakami 等人：“6-甲氧甲氧甲基-3-甲氧基-1,2-二恶烷的简易构建，海绵抗疟疾过氧化物的核心结构”Tetrahedron Lett.. 42(41)。