樹状細胞の遺伝子操作によるがん免疫強化法に関する研究

研究如何通过树突状细胞的基因操作增强癌症免疫力

• 批准号: 13218093
• 负责人: 西岡 安彦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218093/
• 关键词: 癌; 免疫; 遺伝子; 遺伝子治療; 樹状細胞

ヒト末梢血単球よりGM-CSFとIL-4を用いて誘導した樹状細胞を用い、ヒト樹状細胞への遺伝子導入法の確立を目指した研究を行った。まずアデノウイルスベクターAxCAEGFPを作成し遺伝子導入効率を検討した。通常の感染方法では、アデノウイルスを用いた場合においても高い効率で遺伝子導入するには高濃度のウイルスが必要であった。一方、アデノウイルス感染時に37℃で2000xg、2時間の遠心を併用することで10〜50MOIでも遺伝子導入効率は80%以上に向上すると共に、遺伝子発現強度も有意に増加した。また、本法で遺伝子導入した樹状細胞の生存率は遺伝子導入をしていない樹状細胞のそれと同等で、混合リンパ球反応におけるリンパ球増殖刺激効果も保たれており、樹状細胞へのダメージは認められなかった。そこでアデノウイルスベクターを用いてヒト単球由来樹状細胞へのインターロイキン12(IL-12)遺伝子導入を行い、その免疫学的性状を解析した。我々の開発した遠心法を用いてAxlCihp40ip35を感染させたところ、経時的にIL-12p70の産生が認められ、48時間で8.lng/10*6cellsのIL-12産生を得た。IL-12遺伝子導入樹状細胞の表面抗原発現では、コントロールのEGFP遺伝子を導入した樹状細胞と比較してCD80、CD83、CD86、HLA classI、classIIの発現増強を認め、やや成熟した表現形を示した。しかし、FITC-デキストランを用いた貧食能の検討ではコントロールの樹状細胞と同程度の貧食能を認めた。またIL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞の免疫増強効果を、アロ及びオートのヒト混合白血球反応を用いて検討した。その結果、いずれの反応においてもIL-12遺伝子導入樹状細胞は、コントロールのEGFP遺伝子導入樹状細胞に比較して、リンパ球刺激活性の著しい増強を認めた。以上からヒト樹状細胞に対してもIL-12遺伝子導入が可能であり、IL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞は強力な免疫増強作用を有することが示唆された。

Study on the application of GM-CSF to dendritic cells and the establishment of dendritic cell gene transfer method The number of successful candidates is estimated to be 1,000. Usually, infection methods are used in cases where high infection rates are necessary. When infected at 37℃, 2000xg, 2 hours and at a distance of 10 ~ 50MOI, the gene introduction rate was more than 80%, and the gene expression intensity increased intentionally. The survival rate of dendritic cells introduced by this method is similar to that of dendritic cells introduced by this method. The introduction of IL-12 gene into dendritic cells and the analysis of immunological characteristics of the cells were studied. The development of IL-12p70 in 48 cells was detected by using AxlCihp40 ip35. The expression of IL-12 gene on dendritic cells was compared with CD80, CD83, CD86, HLA class I and class II. The study of poor nutrition in the use of FITC-100 cells showed that the poor nutrition in the use of FITC-100 cells was similar to that in the use of dendritic cells. The immune enhancement effect of IL-12 gene introduced into dendritic cells was studied in vitro. The results showed that IL-12 gene was introduced into dendritic cells and EGFP gene was introduced into dendritic cells. The above demonstrates that the introduction of IL-12 gene into dendritic cells is possible, and the introduction of IL-12 gene into dendritic cells has a powerful immune enhancement effect.

项目成果

Suzuki, Y. et al.: "Efficient generation of dendritic cells from alveolar and pleural macrophages as well as blood monocytes with lung cancer"Lung Cancer. 34(2). 195-205 (2001)

Suzuki, Y. 等人：“从肺泡和胸膜巨噬细胞以及血液单核细胞中有效生成树突状细胞与肺癌”肺癌。

Hanibuchi, M. et al.: "Immunological circumvention of multiple organ metastases of multidrug resistant human small cell lung cancer cells by mouse-human chimeric anti-ganglioside GM2 antibody KM966"Clin. Exp. Metastasis. 18. 353-360 (2001)

Hanibuchi, M. 等人：“通过小鼠-人嵌合抗神经节苷脂 GM2 抗体 KM966 对多重耐药人小细胞肺癌细胞的多器官转移进行免疫学规避”Clin。

Nishioka, Y. et al.: "Human monocyte-derived and CD83+ blood dendritic cells enhance NK cell-mediated cytotoxicity"Eur J Immunol. 31(9). 2633-2641 (2001)

Nishioka, Y. 等人：“人单核细胞来源的和 CD83 血液树突状细胞增强 NK 细胞介导的细胞毒性”Eur J Nutrition。

Nokihara, H. et al.: "A new quinoline derivative MS-209 reverse multidrug resistance and inhibits multiorgan metastases by P-glycoprotein-expressing human small cell lung cancer cells"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 785-792 (2001)

Nokihara, H.等人：“一种新的喹啉衍生物MS-209可逆转多药耐药性并抑制表达P-糖蛋白的人小细胞肺癌细胞的多器官转移”Jpn。

Nishimura, N. et al.: "Enhanced efficiency by centrifugal manipulation of adenovirus-mediated interleukin 12 gene transduction into human monocyte-derived dendritic cells"Hum. Gene Ther.. 12. 333-346 (2001)

Nishimura, N. 等人：“通过离心操作将腺病毒介导的白细胞介素 12 基因转导至人单核细胞衍生的树突状细胞中，从而提高效率”Hum。