ウイルスベクターによる樹状細胞への高効率遺伝子導入と癌免疫遺伝子治療への応用

使用病毒载体将基因高效转移至树突状细胞并应用于癌症免疫基因治疗

• 批准号: 12770230
• 负责人: 西岡 安彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-12770230/
• 关键词: 樹状細胞; 遺伝子導入; アデノウイルスベクター; IL-12; 免疫遺伝子治療; 腫瘍免疫; 抗腫瘍効果

平成13年度は、アデノウイルスベクターを用いてヒト単球由来樹状細胞へのインターロイキン12(IL-12)遺伝子導入を行い、その免疫学的性状を解析した。まず通常の感染法を用いてヒト樹状細胞に対して20MOI(multiplicity of infection)にてAx1Cihp40ip35による遺伝子導入を行い、その培養上清中のIL-12p70蛋白の産生をELISAにて検討したが、IL-12の産生は認められなかった。一方、我々の開発した遠心法を用いてAx1Cihp40ip35を感染させたところ、経時的にIL-12p70の産生が認められ、48時間で8.1ng/10*6 cellsのIL-12産生を得た。また、IL-12遺伝子導入樹状細胞のviabilityはアデノウイルス感染を行っていない樹状細胞と同程度であり、遺伝子導入操作による細胞障害性は認められなかった。IL-12遺伝子導入樹状細胞の表面抗原発現を検討したところ、コントロールのEGFP遺伝子を導入した樹状細胞と比較してCD80、CD83、CD86、HLA classI、classIIの発現増強を認め、やや成熟した表現形を示した。しかし、FITC-デキストランを用いた貧食能の検討では、コントロールの樹状細胞と同程度の貧食能を認めた。またIL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞の免疫増強効果を、アロ及びオートのヒト混合白血球反応(mixed leukocyte reaction : MLR)を用いて検討した。その結果、いずれの反応においてもIL-12遺伝子導入樹状細胞は、コントロールである遺伝子導入を行っていない樹状細胞およびコントロールのEGFP遺伝子を導入した樹状細胞に比較して、リンパ球刺激活性の著しい増強を認めた。以上からヒト樹状細胞に対してもIL-12遺伝子導入が可能であり、IL-12遺伝子導入ヒト樹状細胞は強力な免疫増強作用を有することが示唆された。

13 annual は, pp.47-53 ア デ ノ ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い て ヒ ト 単 ball origin dendritic cells へ の イ ン タ ー ロ イ キ ン 12 (IL - 12) heritage 伝 import line を い, そ の immunological properties を parsing し た. Youdaoplaceholder0 usually, the <s:1> infection method を uses てヒト てヒト dendritic cells に against て て20MOI(multiplicity of Infection) に て Ax1Cihp40ip35 に よ る heritage 伝 import line を い, そ の culture supernatant of の IL - 12 p70 produced の を ELISA に て beg し 検 た が, IL - 12 の produce は め ら れ な か っ た. A party, I 々 の open 発 し た far art を with い て Ax1Cihp40ip35 を infection さ せ た と こ ろ and 経 に IL - 12 p70 の produce が recognize め ら れ, 48 で 8.1 ng / 10 * 6 cells の IL - 12 produce を た. ま た, IL - 12 but 伝 import dendritic cells の viability は ア デ ノ ウ イ ル ス line infection を っ て い な い dendritic cells と with degree で あ り, but 伝 import operation に よ る cells handicap of sexual は recognize め ら れ な か っ た. Traces of IL - 12 伝 son import dendritic cells の surface antigen 発 を now beg し 検 た と こ ろ, コ ン ト ロ ー ル の EGFP heritage 伝 son を import し た dendritic cells と compare し て CD80, CD83, CD86, HLA classI, classII の 発 now raised strong を confess め, や や mature し た performance form を shown し た. し か し, FITC デ キ ス ト ラ ン を with い た poor food can の beg で 検 は, コ ン ト ロ ー ル の dendritic cells と の poor food to the same extent を recognize め た. ま た IL - 12 posthumous son 伝 import ヒ ト dendritic cells の immune raised strong working fruit を, ア ロ and び オ ー ト の ヒ ト mixed white blood cells against 応 (mixed leukocyte reaction: MLR) provision を with い て beg し 検 た. そ の results, い ず れ の anti 応 に お い て も traces of IL - 12 伝 import は dendritic cells, コ ン ト ロ ー ル で あ る posthumous son 伝 import line を っ て い な い dendritic cells お よ び コ ン ト ロ ー ル の EGFP heritage 伝 son を import し た dendritic cells に compare し て, リ ン パ ball spurred activity の し い raised strong を recognize め た. Above か ら ヒ ト dendritic cells に し seaborne て も traces of IL - 12 伝 son import が may で あ り, IL - 12 but 伝 import ヒ ト dendritic cells は powerful な strong immune raised effect を す る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Nokihara,H. et al.: "Natural Killer cell-dependent suppresion of systemic spread of human lung adenocarcinoma cells by monocyte chemoattractant protein-1 gene transfection in SCID mice"Cancer Res. 60. 7002-7007 (2000)

野木原，H.

Nishimura,N. et al.: "Down-regulation by a new anti-inflammatory compound, FR167653,of differentiation and maturation of human monocytes and bone marrow CD34(+) cells to dendritic cells"Int J Immunopharmacol. 22. 501-514 (2000)

西村，N.

Suzuki, Y. et al.: "Efficient generation of dendritic cells from alveolar and pleural macrophages as well as blood monocytes with lung cancer"Lung Cancer. 34(2). 195-205 (2001)

Suzuki, Y. 等人：“从肺泡和胸膜巨噬细胞以及血液单核细胞中有效生成树突状细胞与肺癌”肺癌。

Nishimura,N. et al.: "Enhanced efficiency by centrifugal manipulation of adenovirus-mediated interleukin-12 gene transduction into human monocyte-derived dendritic cells"Hum Gene Ther. (in press).

西村，N.

Hanibuchi, M. et al.: "Immunological circumvention of multiple organ metastases of multidrug resistant Humans small cell lung cancer cells by mouse-human chimeric anti-ganglioside GM2 antibody KM966"Clin. Exp. Metastasis. 18. 353-360 (2001)

Hanibuchi, M. 等人：“通过小鼠-人嵌合抗神经节苷脂 GM2 抗体 KM966 对多重耐药人类小细胞肺癌细胞的多器官转移进行免疫规避”Clin。