Transkriptomprofilierung von Embryo- und Endometriumsbiopsien basierend auf dem Trächtigkeitserfolg nach Transfer von in vitro und in vivo produzierten bovinen Embryonen

Die embryonale Mortalität ist eine wesentliche Ursache fre mangelnde Fruchtbarkeit beimRind。Das Hauptziel unseres项目1 . die Analyse des transriptomprofiles von Embryonenund des endomeums während des ganz frhen Trächtigkeitsstadiums in Bezug auf dieInitiierung einer Trächtigkeit nach体内移植与体外培养胚系统。Biopsierte Embryonen werden和Tag 7 ndem Östrus transferiert。他的zum是24。血浆孕激素研究进展与<s:1>孕激素研究进展与进展与进展trächtige gruppiert。胚胎与子宫内膜异构体：胚胎与子宫内膜异构体。魏氏在28岁时就开始了妊娠期黄体酮治疗。geschlachet和dieentsprechenden gesammelt。在Abhängigkeit der dazugehörigen invivo Embryoentwicklung durchgef<s:2> hrt中进行了全球转录分析（Boviner Affymetrix Array），并对囊胚系统和子宫内膜进行了检测。所以können Expressionsprofile von Embryonen am tag7,16和28 ermittelt werden。Vergleichende Analysen der Expressionsprofile zwischen denunterschiedlichen Stadien werden zur Identifizierung whichtiger Gene fr die fr<e:1> hembryonaleentwicklung f<e:1> hren und characterteristische Pathways zur Etablierung und Aufrechterhaltung derfrhen Trächtigkeit werden identifiziert werden。[4][1][9][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1][1]。Zusätzlich werden mittelels vergleichender sequenzierungsnp in den candidate genen identifiziert, die mit Spermienparametern des Bullen and derNon-Return-Rate asszierert werden。在养牛业中，胚胎死亡占生殖浪费的最大比例。该项目的主要目标是确定在体外或体内来源的囊胚移植后，早期发育阶段的牛胚胎和子宫内膜的转录谱与妊娠成功的关系。为此，经活检的胚胎将在发情后第7天转移到同步受体，直到第24天，将测量血浆浓度并确定受体的妊娠状态，并将动物分为妊娠（血浆水平快速升高）和非妊娠（血浆水平缓慢升高）。每组6只于第16天屠宰，收集胚胎和子宫内膜样本进行分析。对血浆孕酮浓度迅速升高的动物进行进一步随访，并于第28天进行超声引导下的妊娠控制。6只怀孕的动物和6只未怀孕的动物将被屠宰，胚胎样本将被收集以作进一步分析。移植前收集的囊胚活检的转录谱将根据移植后的妊娠成功进行。此外，将使用牛Affymetrix阵列（~22,000 est）对妊娠第16天和28天的体外和体内衍生胚胎进行比较转录分析。移植前获得的子宫内膜活检也将用于基于移植后妊娠成功的转录和蛋白质组学分析。有了这种方法，就可以绘制胚胎在移植时（使用收集的囊胚活组织检查）和怀孕期间（第16天和28天）的表达谱。这些表达谱的比较分析将有助于识别候选基因，并绘制胚胎移植后胚胎存活的相关途径。此外，将利用RNA干扰技术研究部分候选基因在早期胚胎发育中的功能作用，并确定候选基因在单核苷酸水平上的多态性与公牛的育性性状即不收益率（NRR）有关。

Die embryonale Mortalität ist eine wesentliche Ursache für mangelnde Fruchtbarkeit beimRind. Das Hauptziel unseres Projekts ist die Analyse des Transkriptomprofils von Embryonenund des Endometriums während des ganz frühen Trächtigkeitsstadiums in Bezug auf dieInitiierung einer Trächtigkeit nach Transfer von in vivo oder in vitro erzeugten Blastozysten.Biopsierte Embryonen werden am Tag 7 nach dem Östrus transferiert. Bis zum 24. Tagwerden Plasmaprogesteronwerte gemessen und über den Anstieg des Progesteronprofilswerden die Rezipienten in trächtige und nicht trächtige gruppiert. Sechs Tiere jeder Gruppewerden am Tag 16 geschlachtet und Embryo- und Endometriumproben gesammelt. WeitereTiere mit starkem Progesteronanstieg werden am 28. Tag geschlachtet und dieentsprechenden Proben gesammelt. Globale Transkriptomanalysen (Boviner Affymetrix Array)werden an den Blastozysten und Endometriumbiopsien in Abhängigkeit der dazugehörigen invivo Embryoentwicklung durchgeführt. So können Expressionsprofile von Embryonen am Tag7, 16 und 28 ermittelt werden. Vergleichende Analysen der Expressionsprofile zwischen denunterschiedlichen Stadien werden zur Identifizierung wichtiger Gene für die frühembryonaleEntwicklung führen und charakteristische Pathways zur Etablierung und Aufrechterhaltung derfrühen Trächtigkeit werden identifiziert werden. Darüber hinaus werden bei ausgewähltenGenen funktionelle Silencing Experimente durchgeführt, um ihre Bedeutung für dieEntwicklung näher zu untersuchen. Zusätzlich werden mittels vergleichender SequenzierungSNPs in den Kandidatengenen identifiziert, die mit Spermienparametern des Bullen und derNon-Return-Rate assoziiert werden.Embryonic mortality accounts for the largest proportion of reproductive wastage in cattlebreeding. The main goal of this project is to determine the transcriptional profile of bovineembryos and endoemtrium at early stage of development in relation to pregnancy successafter transfer of in vitro- or vivo-derived blastocysts. For this biopsied embryos will transferredto synchronized recipients on day 7 after estrus and until day 24 blood plasma concentrationswill be measured and pregnancy status of the recipients will be determined and animals will becategorized to pregnant (with rapid increase in plasma level) and nonpregnant (slow increasein plasma level). Six animals from each group will be slaughtered at day 16 and embryo andendometrium samples will be collected for analysis. Animals with rapid increase in plasmaprogestron concentration are further followed up and ultrasound guided pregnancy control willbe done on day 28. Six animals from pregnant and six animals from nonpregnant animals willbe subjected to slaughter and embryo samples will be collected for further analysis.Transcriptional profile of blastocyst biopsies collected perior to transfer will be performedbased on the pregnancy success after transfer. Moreover, comparative transcriptional analysisof in vitro versus in vivo derived embryos at days 16 and 28 of gestation will be determinedusing bovine Affymetrix array (~22,000 ESTs). The endometrial biopsies obtained prior totransfer will also be used for transcriptional and proteomic analysis based on the pregnancysuccess after transfer. With this it is possible to draw the expression profile of embryos at thetime of transfer (using blastocyst biopsies collected) and during the course of pregnancy(day16 and 28). Comparative anaylsis of these expression profiles will enable to identifycandidate genes and draw pathways related to embryo survival after transfer to recipients.Moreover, the functional role of some of the candidate genes in early embryonic developmentwill be investigated using RNA interefence and polymorphism of the candidate genes at singlenucleotide level will be determined to associate with the fertility trait of the bull i.e. the NonReturn Rate (NRR).