Transkriptomprofilierung von Embryo- und Endometriumsbiopsien basierend auf dem Trächtigkeitserfolg nach Transfer von in vitro und in vivo produzierten bovinen Embryonen

基于体外和体内产生的牛胚胎移植后妊娠成功的胚胎和子宫内膜活检的转录组分析

• 批准号: 53162125
• 负责人: Professor Dr. Andreas Herrler
• 金额: --
• 依托单位: Abteilung Tierzucht und Tierhaltung
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2006-12-31 至 2011-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/53162125?language=en
• 关键词: Transkriptomprofilierung; von; Embryo; und; Endometriumsbiopsien

Die embryonale Mortalität ist eine wesentliche Ursache für mangelnde Fruchtbarkeit beimRind. Das Hauptziel unseres Projekts ist die Analyse des Transkriptomprofils von Embryonenund des Endometriums während des ganz frühen Trächtigkeitsstadiums in Bezug auf dieInitiierung einer Trächtigkeit nach Transfer von in vivo oder in vitro erzeugten Blastozysten.Biopsierte Embryonen werden am Tag 7 nach dem Östrus transferiert. Bis zum 24. Tagwerden Plasmaprogesteronwerte gemessen und über den Anstieg des Progesteronprofilswerden die Rezipienten in trächtige und nicht trächtige gruppiert. Sechs Tiere jeder Gruppewerden am Tag 16 geschlachtet und Embryo- und Endometriumproben gesammelt. WeitereTiere mit starkem Progesteronanstieg werden am 28. Tag geschlachtet und dieentsprechenden Proben gesammelt. Globale Transkriptomanalysen (Boviner Affymetrix Array)werden an den Blastozysten und Endometriumbiopsien in Abhängigkeit der dazugehörigen invivo Embryoentwicklung durchgeführt. So können Expressionsprofile von Embryonen am Tag7, 16 und 28 ermittelt werden. Vergleichende Analysen der Expressionsprofile zwischen denunterschiedlichen Stadien werden zur Identifizierung wichtiger Gene für die frühembryonaleEntwicklung führen und charakteristische Pathways zur Etablierung und Aufrechterhaltung derfrühen Trächtigkeit werden identifiziert werden. Darüber hinaus werden bei ausgewähltenGenen funktionelle Silencing Experimente durchgeführt, um ihre Bedeutung für dieEntwicklung näher zu untersuchen. Zusätzlich werden mittels vergleichender SequenzierungSNPs in den Kandidatengenen identifiziert, die mit Spermienparametern des Bullen und derNon-Return-Rate assoziiert werden.Embryonic mortality accounts for the largest proportion of reproductive wastage in cattlebreeding. The main goal of this project is to determine the transcriptional profile of bovineembryos and endoemtrium at early stage of development in relation to pregnancy successafter transfer of in vitro- or vivo-derived blastocysts. For this biopsied embryos will transferredto synchronized recipients on day 7 after estrus and until day 24 blood plasma concentrationswill be measured and pregnancy status of the recipients will be determined and animals will becategorized to pregnant (with rapid increase in plasma level) and nonpregnant (slow increasein plasma level). Six animals from each group will be slaughtered at day 16 and embryo andendometrium samples will be collected for analysis. Animals with rapid increase in plasmaprogestron concentration are further followed up and ultrasound guided pregnancy control willbe done on day 28. Six animals from pregnant and six animals from nonpregnant animals willbe subjected to slaughter and embryo samples will be collected for further analysis.Transcriptional profile of blastocyst biopsies collected perior to transfer will be performedbased on the pregnancy success after transfer. Moreover, comparative transcriptional analysisof in vitro versus in vivo derived embryos at days 16 and 28 of gestation will be determinedusing bovine Affymetrix array (~22,000 ESTs). The endometrial biopsies obtained prior totransfer will also be used for transcriptional and proteomic analysis based on the pregnancysuccess after transfer. With this it is possible to draw the expression profile of embryos at thetime of transfer (using blastocyst biopsies collected) and during the course of pregnancy(day16 and 28). Comparative anaylsis of these expression profiles will enable to identifycandidate genes and draw pathways related to embryo survival after transfer to recipients.Moreover, the functional role of some of the candidate genes in early embryonic developmentwill be investigated using RNA interefence and polymorphism of the candidate genes at singlenucleotide level will be determined to associate with the fertility trait of the bull i.e. the NonReturn Rate (NRR).

胚胎死亡是一种用于处理果皮上水果的熊。本研究的主要目的是分析子宫内膜异位症患者的胚胎移植情况，并在第7天进行胚胎移植后的韦尔登活检。24. Bis zum Tagwerden Plasmasteresteronwerte gemessen und über den Anstieg des Progesteronprofilswerden die Rezipienten in trächtige und nicht trächtige gruppiert.第16天第三次分组检查，胚胎和子宫内膜检查。在28岁的时候，他就开始了他的韦尔登。标签已经被删除，并已被删除。Globale Transskriptomanalysen（Boviner Affyssine Array）韦尔登可用于胚胎移植过程中的囊胚和子宫内膜活检。因此，在标签7、16和28上的胚胎表达谱是韦尔登的。表达谱的垂直分析表明，韦尔登阶段可用于鉴定胚胎发育的基因，并可用于鉴定胚胎发育的特征途径，以确定韦尔登的韦尔登特征。Darüber hinaus韦尔登bei ausgewähltenGenen funktionelle Silencing Experimente durchgeführt，um ihre Bedutung für dieEntwicklung näher zu untersuchen. Zusätzlich韦尔登mittels vergleichender SequenzierungSNPs in den Kandidatengenen identifiziert，die mit Spermienparametern des Bullen und derNon-Return-Rate assoziiert韦尔登.胚胎死亡率在牛育种中占生殖损耗的最大比例。本研究的主要目的是确定牛胚胎和子宫内膜在发育早期的转录谱与体外或体内囊胚移植后妊娠成功的关系。为此，将在发情后第7天将活组织检查的胚胎转移到同步化受体，并测量血浆浓度，直至第24天，并确定受体的妊娠状态，将动物分为妊娠（血浆水平快速升高）和非妊娠（血浆水平缓慢升高）。每组6只动物将在第16天屠宰，并采集胚胎和子宫内膜样本进行分析。进一步随访血浆孕激素浓度快速增加的动物，并在第28天进行超声引导的妊娠控制。将对6只妊娠动物和6只非妊娠动物进行屠宰，并采集胚胎样本进行进一步分析，根据移植后妊娠成功情况对移植前采集的囊胚活检组织进行转录谱分析。此外，将使用牛Affyssin阵列（约22，000个EST）确定妊娠第16天和第28天体外与体内衍生胚胎的比较转录分析。移植前获得的子宫内膜活检也将用于基于移植后妊娠成功率的转录和蛋白质组学分析。有了这个，就有可能在移植时（使用收集的胚泡活检）和怀孕过程中（第16天和第28天）绘制胚胎的表达谱。通过对这些基因表达谱的比较分析，可以确定与胚胎移植后存活相关的候选基因和途径，并利用RNA干涉技术研究其中一些候选基因在胚胎早期发育中的功能，以及这些候选基因在单核苷酸水平上的多态性与公牛生育力性状即不归率（NRR）的关系。