新規CD28ファミリー分子AILIMを介するシグナル伝達機構の解析

新型CD28家族分子AILIM介导的信号转导机制分析

基本信息

批准号：
13771389
负责人：
原田陽介
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Tokyo University of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771389/
关键词：
T細胞補助シグナル CD28 ICOS AILIM T細胞活性化

项目摘要

AILIM/ICOSは、CD28シグナルと同様にT細胞の増殖やINF-γ、IL-4の産生を誘導するが、CD28シグナルとは違いIL-2産生の増強をほとんど起こさないことが分かっている。そこで、我々はこのような違いがどのようなシグナル伝達経路の違いで生まれてくるのかを解析した。CD28の細胞内領域にはYMNM motifが存在し、PI3-KinaseとGrb2が結合することが知られている。一方、AILIMには同じ位置にYMFM motifが存在しておりPI3-Kinaseは結合するがGrb2は結合しない。我々はAILIMがIL-2promoterの活性化をほとんど起こさないのは、AILIMにGrb2が結合できないことがその理由の1つであるのではないかと考え、AILIMにGrb2を結合させるためにYMFM motifのFをNに置換した変異遺伝子AILIM YMNMを作製しIL-2 promoterの活性を検討した。その結果、この1アミノ酸の変位によりAILIMはIL-2 promoterの活性化を誘導することができるようになった。さらにIL-2 promoter上のどの領域を活性化しているのかを検討したところ、Grb2をAILIMに結合させることでNFAT/AP-1 siteの活性化はCD28と同等に誘導できるようになったが、CD28RE/AP-1 siteとNFκB siteの活性化は十分にはおこらず、YMNM motif以外のCD28細胞内領域がこれらの領域の活性化に必要であることが分かった。これらの結果は、Grb2の結合に影響を与える1アミノ酸の違いがCD28とAILIMを介する補助シグナルの機能的な違いを決定する一因であることを示唆している。

与CD28信号相似，AILIM/ICO会诱导T细胞增殖以及INF-γ和IL-4产生，但与CD28信号不同，已经发现IL-2产生的增强很少。因此，我们分析了这些差异的哪种信号通路。 YMNM基序存在于CD28的细胞内区域，众所周知，PI3-激酶和GRB2结合。另一方面，YMFM基序存在于AILIM中的相同位置，PI3-激酶结合但GRB2不结合。我们认为AILIM很少激活IL-2启动器的原因之一是因为GRB2无法与AILIM结合，因此我们创建了一个突变基因AILIM YMNM，在该基因中，YMFM基序的F被N替换为N，以便将GRB2与aLILIM结合到IL-2启动者的活性。结果，这种氨基酸的位移使AILIM诱导IL-2启动子的激活。此外，我们研究了激活IL-2启动子上的哪些区域，尽管GRB2与AILIM结合允许在与CD28，CD28RE/AP-1位点相当的情况下激活NFAT/AP-1位点，但CD28RE/AP-1位点和NFκB位点没有完全激活，并且没有完全激活CD28RE/AP-1的位点，并且CD28RE/AP-1的内部和NF-κBENTER又激活了nfκBB，并没有完全激活。激活这些区域需要比YMNM基序。这些结果表明，一个影响GRB2结合的氨基酸差异是确定CD28和AILIM介导的辅助信号之间功能差的一个因素。