权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

DNA修復タンパク質Rad18複合体の生化学的解析

DNA修复蛋白Rad18复合物的生化分析

基本信息

批准号：
13771398
负责人：
木村圭志
金额：
$ 1.47万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

分裂酵母では、Rad18はもう一つのSMCタンパク質Spr18と他の数個のnon-SMCタンパク質と複合体を形成している。Rad18複合体はDNA修復に働いていると報告されている。さらにDNA複製にも働いていることが示唆されているが、細胞内でのRad18の機能や細胞周期における制御はあまり多くは知られていない。真核生物では、Rad18複合体のほかに、コンデンシン、及びコヒーシンと呼ばれるSMCタンパク質複合体が存在しており、それぞれ染色体の凝縮、姉妹染色分体どうしの対合といった過程に働いている。当研究の目的は、HeLa細胞を用いてRad18複合体の細胞内での機能や生化学的な活性を調べることであるが、まず対照としてコンデンシン複合体の解析を進めた。ヒトのコンデンシンの各サブユニットに対する抗体を作製し、HeLa細胞を用いた同調実験によりコンデンシンの細胞周期における挙動を観察した。^<32>P正リン酸を用いたパルスチェイスの実験により、HeLa細胞ではコンデンシンのSMCサブユニットの一つと三つのnon-SMCサプユニットがM期特異的にリン酸化され、M期からG1期に進行する際に著しく脱リン酸化された。分裂間期には顕著なリン酸化は観察されなかった。一方、コンデンシンのタンパク量は細胞周期を通じてあまり大きな変動を示さなかった。また、ツメガエルのM期卵抽出液から精製したコンデンシンはATPとトポイソメラーゼl存在下で弛緩した環状DNAに正のスーパーコイルを導入する活性を持つが、HeLa細胞のコンデンシンもM期特異的にスーパーコイリング活性を示した。これらの結果から、HeLa細胞においてコンデンシンの機能が量ではなくリン酸化により制御されていることが示唆された。現在、Rad18複合体に対しては、ヒトのRad18、及びSpr18のペプチド抗体を作成中で、抗体価が上がりつつある。

Fission yeast, Rad18, SMC, Spr18, and several other non-SMC genes were cloned to form a DNA complex. Rad18 copy, DNA repair, report, repair, repair and repair. The DNA replicator was used to indicate that the cell cycle was regulated by the mechanism of cell cycle regulation, such as the cell cycle, and so on. In eukaryotes, Rad18 replicates, SMC clones, eukaryotes, clones, clones, clones When the purpose of the study, the HeLa cell was used to analyze the bioactivity of the Rad18 complex, the biochemical activity of the intracellular enzyme, the bioactivity of the biochemistry, and the analysis of the complex. The antibody was used as the antibody in each cell, and the HeLa cell was used to detect the cell cycle. ^ & lt;32>P is in the process of deacidification in terms of phase 1, phase 1, During the period of mitosis, there was a lot of acidification in the period of division. On the other hand, the information system is used to measure the cell cycle. The activity of the cell cycle is displayed in a large scale. The sperm extract from the M phase of the egg extract was detected in the presence of a relaxed DNA environment in which there was a significant increase in the activity of the egg extract in the M phase, which was detected in the presence of a relaxation DNA. The activity of the HeLa cell was significantly higher than that of the M phase. The results of the experiment and HeLa analysis show that there is a significant increase in the capacity of the equipment, the acidification mechanism, the control system, the control system and the control system. At present, the Rad18 replicates, antigens Rad18, and Spr18 clones have been produced in the production of antibodies, and the antibodies have been cloned on the antibodies.