環境ストレスに対するSUMO-1特異的プロテアーゼの機能解析

SUMO-1 特异性蛋白酶响应环境胁迫的功能分析

• 批准号: 13771423
• 负责人: 西田 有
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo University of Pharmacy and Life Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13771423/
• 关键词: SUMO-1; 脱SUMO化酵素; SUMO化; がん; ゲノム; シグナル伝達; 発現制御

SUMO特異的プロテアーゼSMT3IP1の細胞内機能を解析する目的で、これと相互作用するタンパク質としてB23を同定した。SMT3IP1のB23との結合に必須な領域を同定したところ細胞内でSMT3IP1の核小体への局在に必須な領域とほぼ一致した。またこの領域内にはCdc2/サイクリンBによってリン酸化を受けると推定されるセリン/スレオニン残基が数カ所存在し、実際にSMT3IP1はin vitroでリン酸化され、B23との結合は両者ともにCdc2/サイクリンBによってリン酸化を受けると解離した。この結果からSMT3IP1はM期においてB23より解離しているものと考えられた。さらにSMT3IP1と相互作用するタンパク質としてMdm2を同定した。Mdm2はSUMO化され、PIASタンパク質がSUMO化を亢進することを明らかにした。またPIASはandrogen receptorのSUMO化も亢進することを明らかにした。DNAデータ解析により新規のSUMO特異的プロテアーゼSMT3IP3をクローニングした。組み換えタンパク質を作製し、性質を調べたところ、SUMO-2/3特異的なC-terminal hydrolase活性とisopeptidase活性を示し、SUMO-1には全く作用しなかった。またSMT3IP1もSUMO-2/3化タンパク質に作用しやすい性質を示した。さらにGFP-SMT3IP3融合タンパク質はSMT3IP1同様に核小体に局在を示した。タンパク質の構造に損傷を与えるストレス条件に細胞をさらすとSUMO-1ではなくSUMO-2/3の結合したタンパク質が蓄積する報告があることから、これらのストレスがSMT3IP1,SMT31P2与える影響を調べたところ局在は変化しなかった。現在、その他の影響について解析中である。

SUMO-specific protein expression and SMT3 IP1 intracellular function are analyzed for the purpose of determining B23 interaction. SMT3 IP1 and B23 are bound in the same domain, and SMT3 IP1 nucleosomes are bound in the same domain. In this domain, Cdc2/Cdc2/Cdc The result is SMT3IP1 M phase B23 dissociation. SMT3IP1 interaction is identical to Mdm2. Mdm2 SUMO, PIAS, and quality SUMO. PIAS is the first step in the SUMO process of androgen receptor. DNA analysis of new SUMO-specific protocols SMT3IP3 SUMO-2/3-specific C-terminal hydrolase activity and isoptidase activity were shown. SUMO-1 was fully functional. SMT3IP1 SUMO-2/3 is a new type of polymer. GFP-SMT3 IP3 fusion protein is now present in the nucleosomes of SMT3 IP1. A report on the structural damage and accumulation of SUMO-1, SUMO-2 and SUMO-3 in SMT3 IP1, SMT31 P2 and SMT3 P2 is presented. Now, the influence of others is analyzed.

项目成果

Nishida, T., Kaneko, F., Kitagawa, M., Yasuda, H.: "Characterization of a novel mammalian SUMO-1/Smt3-specific isopeptidase, a homologue of rat Axam, which is an Axin-binding protein promoting β-catenin degradation"The Journal of Biological Chemistry. 276

Nishida, T.、Kaneko, F.、Kitakawa, M.、Yasuda, H.：“一种新型哺乳动物 SUMO-1/Smt3 特异性异肽酶的表征，该酶是大鼠 Axam 的同源物，是一种促进 β 的轴蛋白结合蛋白-连环蛋白降解”生物化学杂志。276

Nishida, T., Yasuda, H.: "PIAS1 and PIASxα function as SUMO-E3 ligases toward androgen receptor, and repress androgen receptor-dependent transcription"Journal of Biological Chemistry. 277. 41311-41317 (2002)

Nishida, T., Yasuda, H.：“PIAS1 和 PIASxα 作为雄激素受体的 SUMO-E3 连接酶发挥作用，并抑制雄激素受体依赖性转录”《生物化学杂志》277. 41311-41317 (2002)。

Miyauchi, Y., Yogosawa, S., Honda, R., Nishida, T., Yasuda, H.: "Sumoylation of Mdm2 by protein inhibitor of activated STAT (PIAS) and RanBP2 enzymes"Journal of Biological Chemistry. 277. 50131-50136 (2002)

Miyauchi, Y.、Yogosawa, S.、Honda, R.、Nishida, T.、Yasuda, H.：“活化 STAT (PIAS) 和 RanBP2 酶的蛋白质抑制剂对 Mdm2 的 Sumoylation”《生物化学杂志》。