化学的組継ぎ法により作成したリン酸化Max蛋白質の機能と構造に関する研究

化学剪接法磷酸化Max蛋白的功能与结构研究

• 批准号: 13780479
• 负责人: 堀内 正隆
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13780479/
• 关键词: DNA結合蛋白質; リン酸化; 核磁気共鳴; 構造生物学

平成14年度は,昨年度に得られた化学的組継ぎ法により作成したリン酸化Max蛋白質のNMR測定データの解析を進めた.化学的組継ぎ法により作成したリン酸化Max蛋白質は,そのアミノ末端側に安定同位体標識されていない化学合成リン酸化ペプチド由来の領域をもち,カルボキシル末端側に15N安定同位体標識された組換え蛋白質由来の領域をもつキメラ蛋白質である.この化学的組継き蛋白質について,15N同位体フィルターTOCSYを適用すれば,主に化学合成ペプチド領域に由来するアミドプロトンとそれらと相関したスピン系に属するプロトン群のスペクトルが観察できるはずである.実際に15N同位体フィルターTOCSYスペクトルを測定したところ,予想されるアミノ酸に該当するプロトンのうち,アミノ末端のメチオニン以外のスピン系,すなわちリン酸化セリン,アスパラギン酸,アスパラギン,イソロイシン,グルタミン酸,バリン及びアラニンを同定することができた.次に15N同位体フィルターNOESYを適用したところ,先のTOCSYスペクトルと交差する複数のNOESYスペクトルが観察されたので,アミノ酸の連鎖帰属を試みた.現時点ではいくつかのNOESYスペクトルが見つかっていないのだが,全12アミノ酸残基のうち8アミノ酸残基分の連鎖帰属に成功した.現在,スペクトルの同定に見落としがないか,またより良好なNOESYスペクトルが得られないかどうか検討を進めている.さらに側鎖の同定及び立体構造決定に必要な13C/15N二重安定同位体標識あるいは重水素化された組換え体の作成も進めている.

In 2014, the chemical composition method was developed and the NMR analysis of acidified Max protein was carried out. The chemical composition method is used to prepare the acid Max protein, and the terminal side of the protein is stable isotope identification. The chemical synthesis of the acid Max protein is used to prepare the acid Max protein. The chemical composition of the protein, 15N isotope TOCSY is suitable for use in the field of chemical synthesis, mainly in the field of chemical synthesis. In the meantime, the 15N isoform TOCSY was determined, and it was expected that the acid would be removed from the sample, and the end of the sample would be removed from the sample, and the acid would be removed from the sample. NOESY is the first 15N isotope to be detected in the presence of a chain member. At present, the linkage between all 12 amino acid residues and 8 amino acid residues is successful. Now, select all the items you want to see in the same place, and you'll find that they're good. 13C/15N double stable isotope identification is necessary for the determination of the identity and stereostructure of the molecule.