新しく同定された生殖腺刺激ホルモン放出抑制ホルモンの発現制御機構と作用機構

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【背景と目的】我々のグループは最近ウズラの脳から生殖腺刺激ホルモン放出抑制ホルモン(GnIH)という新しい神経ペプチドを発見した。GnIHの作用機構を明らかにするために、GnIH受容体の同定を試みた。3',5'RACE法により同定されたGnIH受容体候補蛋白質は、アミノ酸配列が399aaであり、7つの疎水性膜貫通ドメインがあるから、G-Protein Coupled Receptorの一つと推定された。次に、この蛋白質がGnIHの受容体であることを確認するために、哺乳類細胞に一過的に強制発現した膜蛋白質を用いてLigand Binding Assayを行った。【方法】増幅精製した受容体DNAをInvitrogen社のpcDNA3.1ベクターにライゲーションし、TOP10大腸菌にトランスフォメーションした。次に、Promega社のWizard Maxiprepsでプラスミドを選択し大量作製した。リポフェクション法によりCOS-7細胞にトランスフェクションして、この蛋白質を発現させた細胞の膜画分を用いてBinding Assayを行った。【結果と考察】^<125>IでラベルしたGnIHはMock細胞(コントロールDNAをトランスフェクションしたもの)と結合しない一方で、受容体cDNAを発現させた細胞とは結合した。Specific Binding Assay及びSaturation Binding Assayの結果、この新しく同定された受容体蛋白質はGnIHと高い親和性を示し、GnIHの受容体であることが確認された。今後、下垂体に同じ受容体蛋白質が発現していることを調べるために、下垂体組織でのBinding Assayを行う予定である。