新しく同定された生殖腺刺激ホルモン放出抑制ホルモンの発現制御機構と作用機構

新发现的促性腺激素释放抑制激素的表达控制机制和作用机制

基本信息

批准号：
02F02504
负责人：
筒井和義
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

最近、筒井らは生殖腺刺激ホルモンの放出を抑制する新規視床下部ペプチドをウズラから同定して生殖腺刺激ホルモン放出抑制ホルモン(gonadotropin-inhibitory hormone, GnIH)と名付けた。GnIHの作用機構を明らかにするために、本研究ではGnIH受容体の同定を試み、機能解析を行なった。鳥類から同定されたGnIHはC末端側にRFamide構造を有する12アミノ酸残基のペプチドである。一方、GnIHと同族のラットRFamideペプヂド(rat RFRP)の受容体が最近同定された。そこで、この受容体の構造を基に、3',5'RACE法を用い、ウズラの間脳からGnIH受容体cDNAのクローニングを行なった。クローニングされたcDNAは全長が1479bpであり、ORFが1197bpであった。アミノ酸配列は399aaであり、7つの疎水性膜貫逓ドメインがあることから、G protein-coupled receptor(GPCR)と推定された。さらに、同定されたこのタンパク質がGnIHの受容体であることを確認するために、哺乳類細胞(COS-7)に一過的に強制発現させて、ligand binding assayを行なった。Scatchard plot解析により、このタンパク質は、GnIHとGnIH遺伝子関連ペプチドと高親和性の結合を示すことがわかった。以上の解析から、同定したタンパク質はGnIH受容体として機能していると考えられる。また、RT-PCR/Southern hybridization法により、GnIH受容体mRNAの発現部位を解析した。その結果、GnIH受容体mRNAは脳下垂体と間脳などの様々な脳領域に発現することが確認された。GnIH受容体mRNAは脳下垂体に発現していることから、GnIHは脳下垂体に直接作用して生殖腺刺激ホルモンの放出を抑制することが考えられる。さらに、GnIH受容体は視床下部のある間脳にも発現していることから、GnIHは視床下部にも作用して生殖腺刺激ホルモン放出ホルモンの放出を抑制する可能性がある。以上な研究結果は日本動物学会において発表し、本年度中に国際誌から掲載される。

最近，Tsutsui等人。已经确定了一种新型的下丘脑肽，该肽抑制了Quail中促性腺激素抑制激素（GNIH）的释放。为了阐明GNIH的作用机理，我们试图在本研究中识别GNIH受体并进行了功能分析。从鸟类中鉴定出的GNIH是一个12氨基酸残基肽，在C末端具有RFAMIDE结构。同时，最近已经鉴定出与GNIH同源的大鼠rfamide肽（大鼠RFRP）的受体。因此，基于该受体的结构，使用3'，5'种族方法将GNIH受体cDNA从鹌鹑的dibrain克隆。克隆的cDNA的总长度为1479 bp，ORF为1197 bp。氨基酸序列为399AA，由于存在七个疏水性跨膜结构域，因此被估计为G蛋白偶联受体（GPCR）。此外，为了确认鉴定的蛋白是GNIH的受体，配体结合测定是通过在哺乳动物细胞中瞬时强迫表达（COS-7）进行的。 Scatchard图分析表明，该蛋白质表现出与GNIH和GNIH基因相关肽的高亲和力结合。基于上述分析，据信鉴定出的蛋白质是GNIH受体。此外，通过RT-PCR/Southern杂交方法分析了GNIH受体mRNA的表达位点。结果，已经证实了GNIH受体mRNA在垂体和脑脑部等各个大脑区域表达。由于GNIH受体mRNA在垂体中表达，因此人们认为GNIH直接作用于垂体上，并抑制促性腺激素激素的释放。此外，由于位于下丘脑中的Diencephalon中也表达了GNIH受体，GNIH也可以作用于下丘脑，并抑制促性腺激素释放激素的释放。上述研究结果将在日本动物学学会上介绍，并将在今年的一份国际杂志上发表。