フグ毒(TTX)保有生物におけるTTXの組織内微細分布-酵素免疫学的アプローチ

TTX 在河豚毒素 (TTX) 携带生物体中的组织微分布 - 酶免疫学方法

• 批准号: 02F00518
• 负责人: 荒川 修
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02F00518/
• 关键词: テトロドトキシン; ヒモムシCephalothrix sp.; ツノヒラムシ; 吻(proboscis); immunogold; 電子顕微鏡; ミドリフグ; リソゾーム; フグ毒; テトロドトキシン(TTX); 免疫組織染色; 組織内微細分布; 光学顕微鏡; モノクローナル抗TTX抗体; 抗マウスIgG immunogold

まず、フグ毒テトロドトキシン(TTX)を保有することが知られている紐形動物(ヒモムシ)と扇形動物(ヒラムシ)を対象として、既報の方店に基づきTTXの組織内微細分布を調べた。すなわち、2003年に広島湾で採取したヒモムシCephalothrix sp.ならびに神奈川県三浦半島で採取したツノヒラムシPlanocera reticulataにつき、10%ホルマリンで固定後、パラフィン包埋し、薄切切片を作成した。いずれも10%H_2O_2および25%ヤギ血清で処理後、抗TTX抗体を反応させ、次いでEnvision+により酵素標識のうえ、DAB基質溶液を用いて発色させた。さらにGill hematoxylinによる対比染色を施した後、光学顕微鏡で観察したところ、Cephalothrix sp.については、まず体壁をみると、TTXの陽性反応(褐色)は、表皮杵状細胞の尖端に配列する小胞と基底膜に認められた。次いで吻(proboscis)では、擬刺胞(pseudocnides)自体にTTXの分布はみられなかったものの、それに隣接する上皮顆粒細胞に顕著な陽性反応が観察された。その他、吻腔(rhynchocoel)上皮、吻腔や血管に近い消化管壁の基底部に分布する小胞、血管中に突き出た腎管の球状末端、卵などにもTTXの分布が確認された。一方、ツノヒラムシでは、卵にのみ顕著なTTX陽性反応が観察された。他方、昨年度の予備実験では、(1)パラホルムアルデヒト等を含むリン酸緩衝液で固定、(2)LR白色樹脂に包埋、(3)超薄切切片作成、(4)抗TTX抗体、次いて抗マウスIgG immunogoldと反応、(5)酢酸ウラニルで染色、(5)電子顕微鏡下での観察、という手順により、フグ組織におけるTTXの超微細分布の可視化が可能であることが示された。この方法をミドリフグTetraodon nigroviridisに適用したところ、TTXは皮の未分化基底細胞と分泌細胞に見られるが、さらに微視的には基底細胞中のリソゾームに局在すること、などか明らかとなった。

The fine distribution of TTX in tissues of animals with different animal types (e.g., New Zealand, New Zealand In 2003, the Cephalothrix sp. was taken from Hiroshima Bay, Kanagawa, Miura Peninsula, and fixed at 10%, embedded and sliced. After treatment with 10%H_2O_2 and 25%H_2O_2 serum, anti-TTX antibody was detected, followed by Envision+, enzyme identification, DAB matrix solution. After Gill haematoxylin staining, optical microscopy was used to detect the presence of TX-positive cells in the basal membrane, Cephalothrix sp., TX-positive cells in the body wall, and TX-positive cells in the tip of the epidermal pestle. In the secondary proboscis, the distribution of TTX in the pseudocnides itself is clearly visible, and positive reactions are observed in adjacent epithelial granular cells. The distribution of TTX in the epithelium, rhinocoel and blood vessels near the basal part of the digestive tract wall was confirmed. A side, a side, a side. Other methods: (1) fixing TTX in acid buffer solution;(2) embedding in LR white resin;(3) ultra-thin sectioning;(4) anti-TTX antibody, secondary anti-TTX IgG immunogold reaction;(5) acid staining;(5) electron microscopy; It is possible to visualize the ultra-fine distribution of TTX in tissue. This method is applicable to Tetraodon nigroviridis, TTX, undifferentiated basal cells and secretory cells in Weishi app.

项目成果

Yahia Mahmud: "Intracellular visualization of tetrodotoxin (TTX) in the skin of a puffer Tetraodon nigroviridis by immunoenzymatic technique"Toxicon. 41・5. 605-611 (2003)

Yahia Mahmud：“通过免疫酶技术观察河鲀皮肤中的河豚毒素 (TTX)”Toxicon 41・5 (2003)。