蛋白質間相互作用を用いた細胞分裂の分子制御機構の解析

利用蛋白质-蛋白质相互作用分析细胞分裂的分子控制机制

• 批准号: 02J00271
• 负责人: 小谷 友也
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02J00271/
• 关键词: Cyclin B; Cdc2; Cell cycle; XMAP215; Microtubule; γ-Tubulin; Dynein

MPF(M期/卵成熟促進因子)はすべての真核生物の細胞分裂と減数分裂を制御する因子であり、触媒サブユニットのCdc2と調節サブユニットのサイクリンBから成る複合体である。しかし、MPFがどのように分裂期を制御するのかは、現在なおほとんど不明である。私は、MPFの作用機構を解析するため、ツメガエル微小管蛋白質XMAP215をクローニングした。この蛋白質は培養細胞内でサイクリンBと結合していると考えられているが、その結合機構や結合が細胞分裂に果たす役割は全く分かっていない。まず、XMAP215のN末のリコンビナント蛋白質を作成した。この蛋白質を精製し、マウスに注射することで、ツメガェルXMAP215を特異的に認識する抗体を2種類作成することに成功した。放射線標識したATPを卵内に注入し減数分裂を進行させた後に、この特異的抗体を用いXMAP215を免疫沈降した結果、XMAP215が減数分裂過程でリン酸化されていることが明らかとなった。このリン酸化はMPFによるものと考えられ、今後、サイクリンBとXMAP215が結合する時期、結合の詳細な仕組みを解析する必要がある。細胞分裂における蛋白質間相互作用を詳細に明らかにするため、XMAP215と蛋白質間結合し、細胞分裂進行に重要な役割を持つと考えられる、γ-Tubulin、Dyneinの蛋白質間相互作用について調べた。その結果、Dyneinがγ-Tubulinを輸送することで紡錘体極が形成されることを証明した。この成果は現在、Journal of Biological ChemistryとInternational Journal of Developmental Biologyに投稿中である。これらの蛋白質はMPFの下流に存在すると考えられ、XMAP215との相互作用を含めて今後の成果が期待される。

MPF(M phase/egg maturation promoter) is a factor that regulates cell division and meiosis in eukaryotes. MPF is divided into two parts. Analysis of the mechanism of action of MPF and microtubule protein XMAP215 The protein binds to cells in culture and binds to the binding mechanism that results in cell division. In addition, XMAP215's N-terminal protein was prepared. The protein was purified and the antibody was successfully prepared. XMAP215 is used as an immunoprecipitation result, and XMAP 215 is used as an acidification agent during meiosis. For example, if you are interested in MPFs, you may wish to contact us at any time. Protein-protein interactions during cell division are described in detail, XMAP215 and protein-protein binding, important for cell division, γ-Tubulin, Dynein and protein-protein interactions are regulated. As a result, Dynein γ-Tubulin was transported and spindle poles were formed. Journal of Biological Chemistry and International Journal of Developmental Biology The protein is present downstream of MPF and XMAP215 interactions are expected to yield results in the future.

项目成果

Tomoya Kotani: "Discrimination of the roles of MPF and MAP kinase in morphologicalchanges that occur during oocyte maturation"Developmental Biology. 252. 271-286 (2002)

Tomoya Kotani：“MPF 和 MAP 激酶在卵母细胞成熟过程中发生的形态变化中的作用的区分”发育生物学。