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Analysis of temporal and spatial control of mRNA translation that is mediated by subcellular structures and novel RNA processing

分析亚细胞结构和新型 RNA 加工介导的 mRNA 翻译的时间和空间控制

基本信息

批准号：
21H02398
负责人：
小谷友也
金额：
$ 11.15万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21H02398/
关键词：
卵母細胞 mRNA 翻訳制御細胞内微細構造 RNAプロセシング

项目摘要

動物の受精卵は、翻訳を抑制した数千種類の mRNA を順次決まった時期に翻訳し、発生現象を進行する。しかし、それぞれの mRNA の翻訳の重要性と、その翻訳を正確に制御する仕組みはほとんど分かっていない。本研究は、受精後の個体形成において翻訳制御が果たす役割と、これら一連の生命現象における翻訳制御システムの原理を解き明かすことを目的とする。昨年度までに、pou5f3 mRNA は卵形成から受精後の卵割期まで顆粒状構造を維持し、なおかつ、卵割期に顆粒内で Pou5f3 タンパク質を合成することを示した。本年度は、pou5f3 の RNA 顆粒が、どのような原理で翻訳の抑制型から活性型へと変化するのか、また、顆粒内でタンパク質を合成する意義について解析した。液滴を拡散させるヘキサンジオールで受精卵と卵割期の胚を処理した結果、抑制型の顆粒は固相様の性質を示し、活性化型の顆粒は液相様の性質を示すことが明らかとなった。液相様の顆粒を拡散し、Puro-PLA 法で新規合成される Pou5f3 を検出した結果、シグナルがほとんど検出されなくなった。従って、顆粒構造は pou5f3 mRNA の翻訳効率を上昇させる役割があると推測される。本年度はさらに、pou5f3 mRNA の 3'末端が削除される現象と翻訳の活性化の関係を詳細に解析した。レポーター mRNA を発現するゼブラフィッシュの解析から、3'末端が長い mRNA は卵割期に翻訳されず、3'末端が短い mRNA は活発に翻訳されることが明らかとなった。反対に内在の pou5f3 mRNA の 3'末端の削除を阻害すると、タンパク質の合成が著しく減少した。これらの成果は、受精後の mRNA の翻訳が新規の分子機構で制御されることを示唆する。

The reproduction of thousands of species of mRNA in fertilized eggs is carried out in sequence. The importance of mRNA translation and the correct control of mRNA translation This study aims to clarify the principles of the control mechanism of post-fertilization individual formation. In the past year, POU5F3 mRNA has been shown to maintain granular structure during egg formation, post-fertilization and egg cleavage, and to synthesize POU5F3 protein within granules during egg cleavage. This year, we analyzed the mechanism of RNA particle formation, inhibition, activity and synthesis in po5 f3. The results of treatment of zygotes and embryos at the oocyte stage, the properties of solid phase of inhibitory particles and the properties of liquid phase of activated particles are shown. Liquid phase particle dispersion, Puro-PLA method, new synthesis of Pu 5 f 3, detection results, detection results, detection results The expression of po5f3 mRNA was increased in the granular structure. This year, we analyzed in detail the relationship between deletion and activation of po5f3 mRNA. The expression of mRNA in the 3'-terminal region of the genome is very different from that in the 3'-terminal region of the genome In contrast, deletion of the 3'end of po5f3 mRNA prevents the synthesis of protein and reduces protein synthesis. The result of this study is that mRNA expression after fertilization is regulated by new molecular mechanisms.